外周血细胞瑞氏（Wright）染色及计数实验——涂片法

瑞氏染料中有美蓝和伊红两种成分，前者为碱性，后者为酸性，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调。血细胞核由去氧核糖核酸和强碱性的组蛋白、精蛋白等形成核蛋白。这种强碱性的物质与瑞氏染料中的酸性染料伊红有亲和力，所以染成红色；核蛋白中还有少量的 弱酸性蛋白，它们又与染液中的碱性染料美蓝起作用而染成蓝色，但含量太少，蓝色反应极弱 ，故核染色呈现紫红色。较幼稚的细胞之胞浆和细胞核之核仁中含有酸性物质，它们与染料中的碱性染料美蓝有亲和力，故染成蓝色。

血液

瑞氏染料纯甲醇磷酸二氢钾磷酸氢二钠

显微镜玻片盖玻片滴管

1.  制作血涂片

（1）滴一小滴血（约5 ul）于干净玻片上，推片与玻片应呈约30°角，用力均匀而较快，且不可复推。

（2）如血滴较小，推得较慢，角度小于30°，所制涂片较薄。

（3）如血滴较大，推得较快，角度比30°大时，则所制涂片较厚。

2.  将标本放平（最好置于一个固定架上），用滴管将染液滴于涂片上，可用滴管将染液驱散，使其布满整个涂片。

3.  染液布满整个涂片后，稍等片刻或立即加入缓冲液，并使缓冲液与染液混均匀。

4.  染液与缓冲液的比例

（1）染液量要充足，否则染液很快蒸发，将染料沉淀于细胞上。

（2）染液与缓冲液的比例为1：2~4左右比较合适。

（3）稀释度越大，染色时间越长，细胞着色较好，反之则越差。

5.  染色时间：视具体情况而定，一般约需10~30分钟。

6.  冲洗：用自来水冲洗涂片上之染料。

7.  显微镜检查：待自然干燥后用光学显微镜检查。

1. 制作血涂片应避免气泡，厚度适中。

2. 染液与缓冲液的比例要适中。

一、正常血细胞形态

1.  成熟红细胞：正常红细胞为两面微 凹而呈盘状，染色后则呈中心浅染之桔红色细胞，平均直径7.6 um。

2.  成熟中性粒细胞：PB中有两种，杆状核和分叶核。杆状核粒细胞形态：圆形或椭圆形，直径10~13 um。胞核如杆状、带状，胞核之凹超过假设核圆径的3/4，而且两端的内外有相当一段的平行。染色质凝固成块状，着色不均匀，其间可有空白区。胞浆内已不含有嗜碱性物质，而满布中性颗粒。中性分叶核粒细胞：圆形，直径10~13 um。核呈分叶状，少者分两叶，多者六、七叶以上，叶与叶之间有细丝相连或完全断开， 或互相重叠。染色质成细块状。胞浆内布满中性颗粒。

3.  成熟淋巴细胞：圆形，直径5~18 um。核圆形或拟蚕豆状，染色质致密成团块状。胞浆量少，蓝色，可有少许圆形、周边整齐的嗜天青颗粒。大淋巴细胞胞浆量多，呈淡蓝色

4.  单核细胞：圆形或不规则形，直径12~20 um。胞核居中或偏一侧，其形不规则。染色质凝集如筛底状或粗线条网状，但无凝集的块状染色质。胞浆量多，灰蓝色，散布许多细小的粉红色颗粒，颗粒多者甚至使胞浆成为粉红色，可有空泡和外浆出现。

5.  血小板：正常血小板为星形、逗点状或不规则状，直径2~5 um，呈淡蓝色，中央推聚 干淡紫红色的小颗粒。