多种细胞快速检测的方法（一）

让小编开始好奇，我的细胞“要怎么判断他们是死是活呢？它们活的好吗?”

我们可以简单将分析细胞活力和增殖测定的方法分成5大类：

1.   代谢增殖测定

2.   DNA合成增殖试验

3.   化学发光细胞活性测定

4.   荧光染料增殖试验

5.   台盼蓝细胞计数

以下简单介绍这些分类的几种常见实验方式吧！（所有图片可点击放大）

代谢增殖测定

MTT检测法

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶，能使额外添加的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan），并沉积在细胞中，死细胞则无此现象。接着用二甲基亚砜（DMSO）溶解沉积在细胞中的甲瓒后，可利用酶标仪490nm波长测光吸收值，依据吸光值（OD值）计算出活细胞数量。在一定细胞数范围内，吸光值与细胞活性成正比（下图1）。

∆ 图1

XTT检测法

与MTT原理相似，皆是利用添加物与活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶反应，并利用酶标仪测定产物光吸收值；不同于MTT法的是，XTT法还原产物是水溶性的橙黄色甲肷，不需经过二甲基亚砜（DMSO）溶解步骤，即可直接测定光吸收值（BI，货号：20-300-1000），操作较MTT方便快速。当XTT与电子耦合剂作用后产生的水溶性甲肷吸光值与活细胞数成正比（下图2）。

∆ 图2

DNA合成增殖试验

BrdU检测法

BrdU为胸腺嘧啶核苷（Thymine）的衍生物，可用于标记活细胞中新合成的DNA（细胞活性周期S期），BrdU可随着DNA复制进入子细胞，因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞DNA都会带有BrdU标记，可通过抗BrdU单克隆抗体检测，借此检测细胞的增殖能力，但BrdU单克隆抗体检测过程需要将部分DNA变性，使部分双股解开成单股才能顺利检测（下图3）。且BrdU为光敏性，因此需要在光线刺激较低（黑暗）的环境下操作，并避光培养。

∆ 图3

EdU检测法

EdU原理跟BrdU检测法很像，都是代替胸腺嘧啶（Thymine, T）渗入正在复制的DNA中，并加入能与Edu反应的荧光染料，即可利用检测荧光值侦测应用于细胞增殖，或在细胞组织级别作为标记追踪等研究（下图4），实验过程不需要经过BrdU检测法的DNA变性处理。

∆ 图4

化学发光细胞活性测定

ATP发光法

ATP是细胞的能量直接来源，ATP发光法是藉由检测细胞内ATP含量来分析细胞增殖。市面上的原理是利用外源的萤火虫荧光素（Luciferin）与荧光素酶（Luciferase），以细胞内含的ATP为能量来源，发生氧化反应产生生物冷光，因此可通过监测冷光光度，来对应ATP含量并判断细胞增殖状况（下图5）。

∆ 图5