多聚螯合物酶组化实验——EnVision法

抗原-抗体反应结合后，第二抗体上标记有多聚化合物（葡聚糖）酶复合物（EnVision 复合物），与第一抗体结合，进而由酶作用底物进行显色定位。EnVision 复合物是利用一种多聚化合物将 HRP 或 AKP 和第二抗体（抗鼠或抗兔 IgG）同时标记在一个多聚化合物上，即形成酶-多聚化合物-第二抗体巨大复合物。每 1 个分子的复合物中约含 70 个分子的 HRP 和 10 个分子的第二抗体，复合物中的 HRP 的绝对数量远高于其他复合物（如 ABC），本身已具备高度放大作用，因此 EnVision 法敏感性显着高于其他方法。复合物中存在多个第二抗体，也增加了该复合物与特异性抗体的结合机会。同时，人体内不存在该多聚化合物，无非特异性干扰，故背景染色浅。此外，染色步骤为两步，且第二抗体孵育时较短，使该方法更省时而简便。

石蜡切片

蛋白酶特异性一抗EnVision 复合物PBSH2O2树胶二甲苯乙醇

滴管玻片

1. 4 μm 常规石蜡切片经烤片后，常规二甲苯、乙醇脱蜡至水，PBS 洗 3 min×3 次。

2. 预处理组织切片（可用酶消化或 AR 或不作任何处理，依一抗质量而定）。

3. PBS 洗 3 min×3 次。

4. 0.3％ H₂O₂ 阻断内源性过氧化物酶 15 min，PBS 洗 3 min×3 次。

5. 适当稀释特异性一抗，37℃ 孵育 1 h，PBS 洗 3 min×3 次。

6. EnVision 复合物（即用型）孵育 30 min，PBS 洗 3 min×3 次。

7. 水洗，复染，常规树胶封片。

8. 结果观察。