多聚螯合物酶组化实验——UIP法

石蜡切片

蛋白酶PBSH2O2树胶二甲苯乙醇特异性一抗N-Histofine 复合物

滴管玻片

1. 4 μm 常规石蜡切片经烤片后，常规二甲苯、乙醇脱蜡至水，PBS 洗 3 min×3 次。

2. 预处理组织切片（可用酶消化或 AR 或不作任何处理，依一抗质量而定）。

3. PBS 洗 3 min×3 次。

4. 0.3％ H₂O₂ 阻断内源性过氧化物酶 15 min，PBS 洗 3 min×3 次。

5. 适当稀释特异性一抗，37℃ 孵育 1 h，PBS 洗 3 min×3 次。

6. N-Histofine 复合物（HRF 氨基酸-抗鼠或抗兔 IgG 复合物）孵育 30 min，PBS 洗 3 min×3 次。

7. 水洗，复染，常规树胶封片。

8. 结果观察。

UIP 法缺点是多聚物中有 N 末端暴露，形成的电荷能和组织细胞发生静电吸附，可造成非特异性染色，染色时需平衡静电荷。