发布时间:2019-08-07 17:11 原文链接: 多肽制备

固相多肽合成就是不断地在固相载体上加入α-氨基和侧链基团被保护的氨基酸。FMOC基团是用来保护α-氨基中的N的,去除保护基团后,再加入第二个氨基酸。产生的多肽通过一个连接臂将C端连接在树脂上,它可以被裂解下来。通常情况下,在多肽从树脂上裂解下来的同时去除侧链保护基团,一般采用哌啶去 FMOC保护基团,肽树脂的裂解和侧链保护基团去除一般用强酸,比如三氟乙酸,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)是树脂去保护、氨基酸反应和洗涤的首选溶剂。

1. 合成步骤:

步骤 溶液或溶剂循环数时间
1 DMF2次30s
2含20%哌啶DMF溶液1次5min
3 DMF1次 30s
4含20%哌啶DMF溶液1次10min
5DMF6次 30s
6Fmoc-AAFHBTUHPBtNMM151次30-60min
7DMF2次30s

              HBTU: 2-(1H-Benzeotriazole-1-yl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorophosphate
  HOBt: N-Hydroxybnzotrizole•H2O
  NMM: N-methylmorpholine

2. 从树脂上分离下来:

步骤 溶液或溶剂循环数时间1 DMF2次30s2含20%哌啶DMF溶液2次10min3 DMF6次 30s4DCM6次30s5DCM6次 30s6干燥1次10min7试剂K1次2.5h

  试剂K:TFA/苯甲硫醚/EDT/苯酚/水=87.5/5/2.5/2.5/2.5(v/v)

3. 纯化:

RP-HPLC纯化

① HPLC条件:

流动相:A)0.1%TFA水溶液

B)0.1%TFA乙腈溶液

梯度:A/ B(90/ 40)到A/ B(40/ 90)30min

流速:1ml/min

温度:室温(23℃)

检测:214nm的紫外

样品:冻干的粗品

② 步骤:

a. 将粗品溶解在流动相中

b. 注入20-30mg(2-2.5ml)样品

c. 将主峰收集到50ml管中

d. 冻干

4. 鉴定:

LC/MS条件:

流动相:A)0.05%TFA水溶液

B)0.1%TFA乙腈溶液

梯度:A/ B(90/ 10)到A/ B(40/ 60)15min

流速:1ml/min

温度:室温(23℃)

检测:214nm的紫外

MS API:ESI