大肠杆菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段实验

实验方法原理

选用本方法可产生用于放射自显影的32P末端标记分子量标志物。放射自显影带的强度与片段长度无关，标记DNA可稳定数月之久。

实验材料 DNA

试剂、试剂盒 dNTP

仪器、耗材 水浴锅

实验步骤

1.  在20 μl 反应体积中，用可产生5’突出端的限制性内切酶消化0.1~0.4 μg DNA。

2.  加入20 μl Ci所需的［α-32P］标记下dNTP（400~800 Ci/mmol）和1 μl 5 mmol/l 3dNTP混合液。

3.  如需要高比活，可加入80 μCi［α-32P］标记的dNTP，加入1 U klenow 酶，30℃’温育15 min。

4.  75℃加热10 min 以终止反应。如果需要，从标记DNA中去除未掺入的前体dNTP。