发布时间：2021-06-05 19:51 原文链接：大鼠肺动脉成纤维细胞

1. 准备工作，开水浴锅，预热试剂，超净工作台紫外照射 30min,找到对应细胞在液氮罐中的位置

2. 紫外照射后风机吹 10min 后，酒精擦拭台面，放入试剂和离心管，取 15ml 离心管，加入 9ml 培养液

3. 在液氮罐中取出细胞，先拧松放液氮，再拧紧，将冻存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出，1-2min

4. 将冻存管喷酒精后放入超净台内，擦干管壁，用 1ml 头将细胞转移到已加培养液的离心管中

5. 800-1000rpm 离心 5min,注意配平

6. 将离心好的细胞弃上清，加入 5ml 完全培养基重悬，用移液管吹打 8-10 次，避免产生气泡，将细胞悬液接种到 250px 培养皿中，补加 5ml 培养液

7. 混匀，十字法或者 8 字法

8. 将混好的细胞放入培养箱中培养

大鼠肺动脉成纤维细胞。注意事项

1. 上述操作方案的数据可作为参考，实际操作已实验室配备的耗材为准，

2. 冻存时含 10%DMSO,事先加 9ml 培养液是为了稀释 DMSO，理论上 1%DMSO

对细胞性

3. 隔着 PE 手套能有效防止水浴过程中导致污染

4. 重悬的体积只是作为参考，具体的根据需要可进行调整

5. 由于复苏过程中已经离心，第二天可根据实际情况选择换液或者不换液（主要针对贴壁细胞）

大鼠肺动脉成纤维细胞。培养操作

1）复苏细胞：将含有 1mL大鼠肺动脉成纤维细胞。悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 250px 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

大鼠肺动脉成纤维细胞。培养注意事项

1. 收到大鼠肺动脉成纤维细胞。后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读大鼠肺动脉成纤维细胞。说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4.静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞汇合度80%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。