大鼠肺成纤维细胞如何进行细胞传代,有哪些方法？

大鼠肺成纤维细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。多呈长梭形，具有突起，细胞胞体较大，胞质弱嗜碱性，胞核较大呈椭圆形，染色质疏松色浅，核仁明显。

　　刚分离的肺成纤维细胞呈圆形，较亮，培养40min左右贴壁，12～24h左右伸展，36～48h进入对数生长期，分离纯化3d后接近融合，并彼此连接成网状。

　　肺成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持肺器官的正常形态，合成和释放细胞外基质，以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

　　大鼠肺成纤维细胞使用方法：

　　1、取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

　　2、待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

　　3、细胞传代

　　①吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。

　　②添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴1~2min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化。

　　③用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。

　　④待大鼠肺成纤维细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。