如何在外泌体研究中正确使用血清

目前，胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）是细胞培养实验中最常使用的试剂，为细胞生长提供丰富的营养物质。

但在外泌体研究中，如果仍然使用胎牛血清培养细胞、通过收集上清液来提取外泌体进行实验，胎牛血清中大量的牛源外泌体将对实验分析造成极大的干扰。

因此，使用FBS时，必须要做牛源外泌体的去除工作。

那么，如何去除胎牛血清中的外泌体呢？

01 超速离心法 

顾名思义，该法基于超高速离心机。有些厂家建议操作为120000g，18h，4℃；

02 超滤法 

芬兰团队（Roman Kornilov et al.）2018年在Journal of Extracellular Vesicles发表的文章介绍，以超滤的方式去除FBS中的外泌体：

Ultrafiltration EV-depleted FBS (UF-dFBS) was obtained by centrifuging regular FBS in Amicon ultra-15 centrifugal filters (ref: UFC910024, 100kDa Merk Millipore Ltd.,
Tullagreen, Carrigtwohill, Co. Cork, Ireland) for 55 min at 3,000 g. 

03 商品化去外泌体血清 

目前市面上已有若干品牌的EV-depleted Serum销售，使用方法和常规胎牛血清一致，无需做额外处理。

当然，我们重点需要考虑几种方法的外泌体去除效率。

上文中提到的芬兰团队将超速离心法、超滤法、S品牌的商品化EV-depleted FBS的外泌体去除效果做了比对。这里，我们看一下NTA（nanoparticles tracking analysis）的对比结果。

FBS：常规胎牛血清

UC-dFBS：超速离心处理的去外泌体血清（121896g，19h）

UF-dFBS：超滤处理的去外泌体血清

SBI-dFBS：S品牌的商品化去外泌体血清

该团队先对三组样本做外泌体提取，将提取物用PBS重悬后用NTA检测，获取的浓度数据可以看出：芬兰团队采用的超滤处理方式和S品牌的颗粒残留量相近，均较低；而用超离处理方式的颗粒残留量要高出1-2倍。从颗粒值推算外泌体去除率，超滤处理方式和S品牌达到96%，超离处理方式仅达88%。

所以，超速离心法的外泌体去除效果并不理想。部分其他文献也有提及，如Tosar JP et al., J Extracell Vesicles, 2017；Wei Z et al., Sci Rep, 2016.

部分研究者会担心胎牛血清经处理后是否会影响细胞的生长，该团队也用几组血清分别培养脂肪来源的MSC，结果发现并无明显差异。

以上数据来自于：Efficient ultrafiltration based protocol to deplete extracellular vesicles from fetal bovine serum (DOI: 10.1080/20013078.2017.1422674)

超速离心法并不一定能达到很好的外泌体去除效果，
当然目前也没有一种方式是可以完全去除胎牛血清中的牛源外泌体。
除非使用无血清培养体系。

逍鹏生物推出的VivaCell 去外泌体血清使用改良版的超滤法，胎牛血清中的外泌体去除率可达97%（甚至更高）。

另外，生产全过程符合GMP要求，可有效预防支原体污染、交叉污染等，且产品在百级环境下过滤除菌分装，可保证产品的无菌效果（见某批次COA截图）。