如何巧妙利用血清培养细胞

在细胞培养实验室中，血清是常见的科研试剂之一，常见的血清种属有人的和动物两种，而动物的又分为牛、猪、鸡、羊等，根据客户对产品种属与来源的选择，价格也是不同的。对于实验新手来说，稍有不慎就会影响到实验结果，甚至让花费几千元买来的血清失去效果。那么我们要如何正确的使用与操作呢？今天上海文韧与您探讨“如何巧妙利用血清培养细胞”。

    我们今天要说的血管平滑肌细胞培养采用的是贴块法，这种方法具有获得平滑肌细胞纯度高，量多，操作简便的优点。但用贴块法易使平滑肌细胞胞质内肌丝丧失，亚细胞器增加。 
        
    操作方法：动物经颈动脉放血后，在无菌操作下迅速取出胸腹主动脉段，置于含Hank's液的平皿中漂洗3次，将凝块洗干净后剥除外膜的纤维脂肪层，然后纵行切开血管，刮除内膜即内皮细胞迅速撕下中膜内、中层，切成约1mm宽的小条，浸泡在含血清的Hank's液中，并将撕下小组织块种植于培养瓶壁。置于37℃恒温箱，2h左右，取出培养瓶加入20%胎牛血清的培养液，再放回培养箱内静止培养4天。4天后可见细胞从组织中迁移游出。

   在这方法中，大家可要注意啦！不同动物血管结构有差异，猪和猴较易操作，但小动物如兔、鼠因其血管小，血管壁薄等特点，使之难以分离。另外组织块太薄，不易粘附培养基，也使细胞较难生长。

上海文韧特别提示，实验中请注意：
1. 根据培养细胞的种属加入适量的不同血清，一般可加入胎牛血清，若小牛血清增殖效果差，应加胎牛血清(FBS)，通常浓度为10%～20%。
2. 培养基的选择：常用的有DMEM，M199培养基。培养兔的平滑肌细胞用DMEM效果较好。
3. 种植组织块的数目，如75cm2的长颈瓶组织块不得少于30。