如何确保黄曲霉毒素测定仪的精确校准？

　　黄曲霉毒素(AFB)是一类由真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)产生的有毒代谢产物，具有很强毒性，能强烈破坏人和动物的肝脏组织，严重时会导致肝癌甚至死亡。黄曲霉毒素主要有B1、B2、G1、G2以及另外两种代谢产物M1、M2。在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1(AFB1)最为多见，其毒性和致癌性也最强。

　　目前AFB1测定方法包括:薄层色谱法、微柱筛选法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等，其中薄层色谱法、微柱筛选法、高效液相色谱法对应的检测仪器为薄层色谱仪、紫外光灯、液相色谱仪等，具有相应的国家检定规程，而酶联免疫吸附法对应的黄曲霉毒素测定仪没有检定规程或校准规范。

　　基于酶联免疫吸附法的黄曲霉毒素测定仪采用固相酶联免疫吸附(简称ELISA)原理，通过AFB1抗体与酶标抗原、待测抗原的竞争免疫反应以及酶的催化颜色反应相结合，产生的显色物在特定波长下(其中按GB /T 5009. 22—2003第二法的波长为490 nm，按GB /T 17480—2008的波长为450 nm)，产生对光的吸收反应，并遵守朗伯-比尔( Lambert-Beer)定律，对AFB1进行定量分析。ELISA测定AFB1具有技术先进、灵敏度高、特异性强、精确度高、重复性好、测定速度快、成本低、污染少、一次可测定大批样品、能限量和定量测定等优点。黄曲霉毒素测定仪主要应用于食品和饲料产品中AFB1的检测，由光源、单色器(干涉滤光片)、样品池、检测器(硅光电池)和A/D转换器等组成，其典型结构如图1所示。

　　目前仪器计量方面存在的问题

　　在日常的检定或校准中，由于缺乏可依据的检定规程或校准规范等技术性文件，使得黄曲霉毒素测定仪计量特性技术指标处于失控状态，影响了仪器计量性能的溯源性和仪器的准确性。

　　校准用标准设备

　　仪器测量显示值为吸光度值，可选用光谱中性滤光片对仪器的吸光度测量值进行校准。光谱中性滤光片吸光度标称值应分别约为0.2、0.5、1.0、1.5，并在450 nm、490 nm波长下定值，其扩展不确定度不大于0. 010 ( k = 2)。

　　仪器干涉滤光片可产生特定波长的单色光，干涉滤光片峰值的波长准确性可用I级或II级分光光度计进行定值。

　　计量性能要求

　　仪器的计量性能要求见表1，各指标不用于合格性判定，仅提供参考。

　　校准方法

　　涉滤光片峰值波长误差

　　分光光度计经充分预热后，采用波长扫描方式测量，以仪器所附干涉滤光片标称峰值波长作为波长扫描的中点，波长扫描范围不少于10 nm，以空气做参比，以0. 1 nm的扫描间隔测量仪器所附干涉滤光片的光谱透射比曲线(入射光束应垂直通过干涉滤光片的中心)，以光谱透射比曲线中透射比最大值对应的波长作为干涉滤光片峰值波长λ。重复测量3次，按式( 1)计算峰值波长误差。

　　式中:Δλ为峰值波长误差，nm;λi为第i次测量的干涉滤光片峰值波长，nm;λs为干涉滤光片标称峰值波长，nm。

　  吸光度零点漂移

　　仪器预热30 min后，在无遮挡光路条件下，调节仪器吸光度为0. 000，10 min后再记录仪器吸光度示值，按式(2)计算仪器的零点漂移。

　　式中: r0为吸光度零点漂移; A010 min为10 min后仪器吸光度零点示值; A0初始为仪器初始吸光度零点示值。

　  吸光度示值稳定性

　　将吸光度标称值为1.0的光谱中性滤光片平放在样品光路中，以空气为参比，测量并记录仪器的初始吸光度示值，10 min后再次记录仪器吸光度示值，按式(3)计算示值稳定性。

　　式中: r为吸光度示值稳定性; A10 min为10 min后仪器吸光度示值; A初始为仪器初始吸光度示值。

　　吸光度示值误差

　　在无遮挡光路条件下，调节仪器吸光度为0.000，将吸光度标称值分别约为0. 2、0. 5、1. 0和1. 5的4块光谱中性滤光片依次放在样品微孔上，分别连续测量3次，记录仪器吸光度示值，并计算平均值，按式(4)计算吸光度各检定点的示值误差。

　　式中:ΔA为吸光度各检定点的示值误差; Ai为第i次测量的仪器吸光度示值; As为中性滤光片吸光度标准值。

　  吸光度示值重复性

　　在0.000，将吸光度标准值约为0. 5的光谱中性滤光片放在样品微孔上，连续测量7次，记录仪器吸光度示值，并计算平均值，以测量结果的相对标准偏差(RSD)作为仪器的吸光度示值重复性，按式( 5)计算。

   式中: A为7 次吸光度示值的算术平均值。