如何选择液相色谱柱？（一）

现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择中。但是色谱填料的选责范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。

一．                      硅胶基质填料   

1，  1，  正相色谱

正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica），以及其他具有极性官能团，如胺基团

(ZH₂,APS)和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他团的极性教强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强落的组份最先被冲洗出色谱柱。

正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯（Chloroform） 二氯甲烷（Methylence  Chloride）等.

2反相色谱

反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对教弱的官能团的键合相。

反相色谱所使用的流动相极性教强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。

样品流出色谱柱的顺序是极性教强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。

常用的反相填料有C18（ODS） C8（MOS）。C4（B）C₆H₅（Phenyl）等。

二聚合物填料

聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸至等，其主要优点是在PG值为1-14均可使用。

相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的淑水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。

现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效教低。

三.其他无机填料

其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的用途。如墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，新型氧化诰填料也可用于       HPLC，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化诰微球色谱柱，应用PH范围1~14，温度可达到100⁰C。由于氧化诰填料几年才开始研究，加之前的实验难度，其重要用途与优势尚在进行中。

怎样选择填料粒度

目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3,5和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填充柱的柱效越高；小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是唯一的因素。如果固定相选择是真确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料是很用有的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5UM填料的柱效提高近30%；然而；3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。

如何保证良好的柱性能与柱寿命

ü       ü       认证阅读色谱柱使用说明书

ü       ü       使用填充良好的色谱柱；

ü       ü       尽量减少压力波动，避免机械及热冲击

ü       ü       使用保护柱及在线过滤器

ü       ü       经常以强溶剂冲洗色谱柱

ü       ü       充分过滤样品及流动相，尽量避免杂质微粒与保强留分成

ü       ü       用稳定的固定相（C18最稳定）

ü       ü       在中等PH纸操作（6~8），用有机年成液溶；

ü       ü       色谱柱使用温度最好小于40⁰C

ü       ü       硅胶基质的的色谱柱，应保持流动相的PH值范围在3.0~8.0

ü       ü       在水流动相与缓冲浓液中加200ppm的叠氮钠

ü       ü       流动相中含有缓冲溶液，应注意应95∶5的水及有机溶剂过渡，有机溶剂不能低于5%

ü       ü       过夜或储存时，冲洗掉盐和缓冲液，用纯有机溶剂流动相保存（乙晴最好）.。

HPLC固定相及应用范围、

姓名   性别    功能基团     正相  反相  离子对      应用

Silica           -OH           √                非极性和中等极性以及非离子性有机化合物。

SAS     C1     -(CH₃)₃            √            在所有的烷基键合相中对非极性化合物保留最弱，典型用于中等极性和多官能团化合物

Buty1   C4      -C₄H₉             √      √       分离肽和蛋白质，保留时间比C8和C18短

MOS    C8      -C₄H₉             √     √        中等极性相中对中等化合物，小肽和蛋白质，极性药，0族化合物和环境样品

ODS    C18，O                    √     √       烷基键合相中对中等极性化合物保留最强。广泛用于药物，0族化合物，脂肪酸和环境样品

CPS   CN ，C              √   √               对极性化合物有独特的选择性，适合应用于正相分离，当用于反相系统时，其选择性与C8和C18不同，在药学领域和复杂混合物的分离中应用广泛。

APS     NH             √     √                     反相中分析糖类和其他极性化合物。弱阴离子交换，阴离子和有机酸则应用缓冲剂和机改性剂做流动相，正相中与硅胶的选择性不同，分析芳香族效果很好

                                                 芳香族化合物

PD                                              反向时，分离胎和蛋白质。正相时，与硅选择性相似

SCX  强阳离子交换                                          有机碱

SAX   强阴离子交换                                     有机酸，核苷和核苷酸