通过调整实验参数来提高流式细胞仪分选纯度的一些方法:
优化荧光阈值:适当提高荧光强度的阈值,仅将荧光信号强的细胞判定为阳性目标细胞,减少弱阳性细胞的误选。
调整散射光参数:仔细分析前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC)的分布,根据目标细胞的大小和颗粒度特征,更精确地设置分选区域,排除非目标细胞。
增加荧光通道数量:使用多个荧光通道同时标记不同的细胞标志物,通过组合分析来更准确地识别目标细胞,从而提高分选纯度。
优化补偿设置:如果使用了多种荧光染料,可能会出现光谱重叠导致的荧光信号干扰。正确设置补偿值,消除这种串色干扰,有助于更准确地识别目标细胞。
调整分选速度:降低分选速度可以使仪器有更充足的时间进行检测和判断,提高分选的准确性,但可能会降低效率。需要在纯度和效率之间找到平衡。
重复分选:对初次分选得到的细胞进行再次分选,进一步提高纯度。
优化液流稳定性:确保液流稳定且均匀,使细胞在检测区域的通过速度和位置更一致,提高检测和分选的准确性。
严格分选逻辑设置:结合多种参数,如细胞大小、荧光强度、多个标志物的表达情况等,制定更严格的分选逻辑,以准确区分目标细胞和非目标细胞。
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