支原体在光学显微镜下也无法看见,它被称为小的细菌。但它没有细胞壁,形态多样。它可粘附在细胞表面,汲取细胞培养液和细胞内的各种营养,严重影响细胞代谢和基因表达。
科研中细胞实验是chang用的科研手段。由于支原体普遍为人体所携带,而且容易在空气中形成气溶胶,因此在细胞培养时,常规应至少一周检测一次支原体。
支原体检测有多种方法,如PCR法(含实时荧光PCR技术)、恒温扩增法、DNA染色法、培养法、支原体酶检测法、ELISA法,以及细胞感应变色法等。
这些方法各有长短,有的结果直观,有的省时,有的精que,有的灵敏度高。因此,这些方法应取长补短。
其中,设计较好的PCR方法能达到10CFU/ml的检测限,灵敏度优于其他方法,故为药厂所青睐。PCR方法还有内控对照,可反映检测过程是否正常。同时,PCR方法能覆盖上百种支原体物种,不容易有假阳性和假阴性,操作也较为省事,不用再去培养细胞,因而应用较为多见。
有些PCR方法检测限能达到20个基因组拷贝数/PCR反应,也相当灵敏。
Robustness(稳定性或耐用性)也是方法评价的指标之一,可反映方法的可靠性和得出结果的稳定性。PCR方法也具有较好的稳定性,不受操作过程的因素波动。
PCR检测细胞上清中的支原体时,只需2ul就可检测。如果是用于药厂的放行检测,则样本需加10ul。
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