定量PCR常见问题(一)

1.      定量PCR仪的开关机顺序是怎样的？

    按照正确的开关机顺序操作，有助于延长仪器的使用寿命，减少仪器出故障的频率。开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件，进行实验。关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭信号收集软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，zui后关闭电脑。

2.      哪些种类的反应管和盖子适合定量PCR实验使用？有何需要注意的地方？

    定量PCR实验可以使用以下耗材：96孔光学反应板配合光学膜，0.2 ml光学八联反应管配合光学膜，0.2 ml光学八联反应管配合平盖的光学八联管盖。ABI公司生产的定量PCR耗材的具体使用方法和货号见下表：

3.      为什么要定期对电脑进行磁盘碎片整理？怎样整理？

    当运行实时定量PCR仪及使用软件分析实验结果时，计算机会删除并创建若干文件，计算机硬盘的空闲空间会被分割成越来越多的小块。当硬盘驱动器上文件以分解的碎片存储时，程序需要更长的时间才能存取文件，因为必须多次寻找文件碎片以存取不同的片断。碎片整理实用程序将一个文件分解开的多个碎片合并在一起，并存储到硬盘的同一个位置，从而清除文件碎片，进而优化系统性能。

碎片整理的方法如下：

·         在Windows桌面上，选择开始(start),我的电脑(My computer)。

·         在(我的电脑)窗口中，用鼠标右键单击硬盘驱动器，并选择(属性)property。

·         在(属性)对话框中选择工具(Tools)选项卡，单击开始整理(Defragment now)。

·         单击碎片整理(Defragment)。

·         当显示“碎片整理完毕”对话框时，单击（确定）。

·         在“本地磁盘属性”对话框中，单击（确定）。

·         为计算机机中剩余的驱动器重复如上步骤。

4.      何时执行windows service pack更新？

    不要执行该操作。除非美国应用生物系统公司代表通知您更新操作系统，否则请不要更新控制定量 PCR 仪的计算机的操作系统。新版本的 Microsoft Windows 操作系统有可能与SDS 软件存在冲突，并导致仪器不能正常运行。如果您希望安装 service pack（更新包）以更新操作系统，应查看随 SDS 软件提供的版本说明，避免兼容性问题。

5.      应该备份哪些数据？

    应该定期备份您的实验数据，备份频率推荐每周一次，用光盘刻录。同时您也应该备份定量PCR仪的各种纯荧光光谱校正文件、背景文件和安装验证实验数据，这些文件所在的目录是C：/Appliedbiosystems/SDS Document。下图是校正文件的样本。

6.      怎么样的实验室环境才能保证仪器设备正常运行？

    良好的实验室环境有助于延长仪器的使用寿命，减少仪器出故障的频率。推荐做到以下几个方面：

    电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。

    通风：仪器的通风应该没有阻挡。

    温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10-30°C之间。

    湿度：20-80%；对于潮湿的省份，推荐实验室配备除湿机。

    空间：易于操作，安全。

7.      怎样判断定量PCR仪的样本加热块是否被污染？怎样清除污染？

    一个办法是运行背景校正反应板，当一个或多个反应孔连续显示出不正常的高信号，则表明该孔可能被荧光污染物。另外一种办法是在不放任何物品到样本块上的前提下，执行ROI的校正，当某个孔的信号明显高出其他孔时，则表明该孔被污染。

    清除样本加热块污染的步骤如下：

    用移液器吸取少量乙醇并滴入每个污染的反应孔中。

    吹打数次。

    将废液吸入废液杯中。

    重复以上步骤：乙醇三次，去离子水三次。

    确认反应孔中的残留液体蒸发完