如果有标准曲线,按照标准曲线计算。
一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算。举例如下:对照组基因A的CT值为20, 内参:比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。
如果是realtime做表达量,用excel的制图,将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了。如你还做了标曲,就用制图中的散点图看R2值。其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对,具体情况具体分析。
技术原理
将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得Ct值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
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