实质肝细胞悬浮液的制备

灌流液

1）        无钙灌流液：每1000ml含NaCl 8.3g、KCl 0.5g、Hepes 2.4g、NaOH（1mol/L）6ml，在37℃时，PH=7.5，渗透压为315mOsm；

2）        胶元酶灌流液：每100ml含NaCl 0.4g、KCl 0.05g、Hepes 2.4g、CaCl₂·2H₂O 0.07g、NaOH（1mol/L）6.6ml、胶元酶IV 0.05g，在37℃时，PH=7.6，渗透压为305mOsm；

3）        肝细胞洗液：100ml无钙灌流液中加入1.5g小牛血清蛋白，在37℃时，PH=7.4。

4）        PBS：每100ml含NaCl 8.0g、KCl 0.2g、CaCl₂ 0.1g、MgCl₂·6H₂O 0.1g、NaH₂ PO₄·2H₂O 1.42g、KH₂ PO₄ 0.2g，在37℃时，PH=7.4

方法：麻醉与手术。于大鼠腹膜腔内注射5%苯巴比妥50mg/kg，将麻醉后的大鼠仰面固定在木板上，木板下垫有吸水棉垫，剪去腹部体毛，用碘酒和酒精消毒腹部皮肤，从腹中线处剪开腹壁，暴露肝脏和与之相连的血管并找出门静脉和下腔静脉。将门静脉与其相连的肠系膜和结缔组织分离。用套管针以20度角在门静脉远端向近端平行刺入，结扎，固定套管针以封闭门静脉远端，立即在下腔静脉壁上剪开一小口，以便血液和灌流后的液体从此口流出。

灌流：*步用蠕动泵将200ml无钙灌流液经灌流管道及接在其末端的套管针泵入静脉，10ml/min，15~20min，第二步用100ml胶元酶继续灌流，流速5~10ml/min，保持灌流温度在37℃。

肝脏处理：将经过灌流的肝脏从大鼠腹腔取出，用剪刀剪成0.3cm³大小的碎块，放入烧杯，在烧杯加入肝细胞洗液100ml，置烧杯在摇床上轻摇6~10分钟，所得的细胞悬液经孔径为300μm的尼龙膜过滤后，倒入50ml离心管，低速离心3~5分钟，弃上清液，再加入PBS 100~150ml，用吸管轻轻吹打沉在管底的细胞，制成肝脏细胞悬液，分离实质细胞和非实质细胞。

湖南湘立研制生产的几款医用离心机可以用来进行细胞分离，如DL5M/TDL5M两种型号的低速冷冻离心机可用来进行干细胞实验。XL03RH型控温离心机（低速冷冻离心机）可用来进行温度敏感型人体细胞分离。