即使样品和流动相己做过前处理,也仍难以完全避免柱子受到污染,因此必须对柱子进行清洗。清洗应定期进行,如果在短期内分析许多样品,则以每日清洗一次为宜,至少也应周一次,防止有太多杂质在柱上堆积
反相柱的常规洗涤办法:分别取甲醇、三氯甲烷、甲醇-水各20倍柱体积(即对于一根4.6mm×25cm的柱来说,通常是50~60ml,而对于9.4mmx50cm的柱来说,通常是500~600ml),使之通过柱子。然后用流动相平衡(通常仍用20倍柱体积),柱一般将恢复正常。如果选择性仍和以前不一样,则表明还有其他杂质留在柱子里,这时应考虑更加严格地清洗先用20倍柱体积的水,再用相同体积0.05mol/L硫酸,最后用流动相溶剂、酸洗常能洗下有机溶剂所不能洗下的剩余杂质。在低pH值下做长期(一天或更长)清洗是不适宜的,但50mI洗液以2ml/min的速度清洗25min,一般对键合相没有损害。注意,强碱不能用来清洗任何微粒硅胶柱(不论是键合相还是非键合相),因为硅胶骨架会溶解。对严重污染的反相柱,只能采用再生的方法。