通常我们在分析天然药物成分的时候结构复杂,无法考察组分的 PKa 值,哪我们如何去选择最合适的流动相或者是拖尾该怎么改善呢?
答:如果天然产物中没有易电离的极性基团,就不需要用缓冲盐调节 pH。如果天然产物中既有酸性基团,也有碱性基团,譬如有 pKa=6.2 的羧基和 pKa=9.0 的氨基的两性物质,建议将 pH 用磷酸盐缓冲盐控制在 2.4(如果是诸如月旭的 Ultimate LP-C18 这样的耐酸色谱柱,还可以调得更低)。
如果 pH 控制在 6.2-9.0 之间,两个基团都处于离子态,保留能力最差,是最不可取的。如果不清楚复杂物质中含有什么基团,也请将 pH 调到 2.4 或更低。因为 pH 调低,起码抑制了酸性基团的电离而处于中性分子状态,而增加酸性基团这个部分在反相色谱中的保留能力;另外低 pH 还抑制了硅醇基的活性,有利于获取对称的峰形。