小鼠支气管平滑肌细胞的分离培养方法

平滑肌即无纹肌的通称，平滑肌是由长纺锤形的单核细胞构成。它不构成独立的器官，而只是成为构成体壁和内脏壁的因素（肌层）。平滑肌细胞互相连接，形成管状结构或中空器官；在功能上可以通过缩短和产生张力使器官发生运动和变形，也可产生连续收缩或紧张性收缩，使器官对抗所加负荷而保持原有的形状。

小鼠支气管平滑肌细胞的收缩、舒张、增殖和凋亡与临床许多疾病的病理生理过程有关．如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘发病时，可以检测到气管平滑肌发生数目的增生和肥大，表型也发生改变，由收缩型转为合成型与分泌型，并分泌多种与细胞因子；而且出现向气管腔迁移的迹象。

小鼠支气管平滑肌细胞的分离培养

1.取4-5周龄的小鼠，断颈处死后，泡于75%的酒精中

2.剖开胸腔，取出完整气管及肺组织，放入无菌PBS中

3.在体视显微镜下，小心分离出下游支气管

4.用眼科剪及镊子分离肌层并剪碎

5.加入0.1% I + II + IV + dispase，4℃过夜消化

6.第二天置于37℃水浴摇床中消化2~3h

7.待液体变浑浊后加入完全培养基终止消化，充分吹打

8.过100目筛网，收集滤液，1000rpm离心5min，弃去上清

9.用完全培养基重悬沉淀，铺瓶。