小鼠神经干细胞的流式染色

实验概要

小鼠神经干细胞的流式染色

主要试剂

• 荧光标记抗体CD133-PE、EGF-Alexa647，10μg/ml的PI，染色液
  

主要设备

15 mL离心管、10%FBS包被的玻璃巴斯德管、移液枪、70 μm细胞滤膜、4℃低温离心机

实验步骤

（1）接神经干细胞的分离和纯化最后一步。去上清，用染色液重悬细胞，向细胞中加入荧光标记抗体CD133-PE（1∶100）和EGF-Alexa647（1∶100），记为管1。取新离心管加入空白染色液，记为管2。4℃下避光孵育30 min。
（2）孵育后，4℃条件下130 g离心5 min，小心地去上清。用1 mL染色液洗细胞，再次同条件离心后去上清。
（3）用500 μl染色液重悬细胞。将所有的样品用70 μm的细胞滤膜过滤后进行流式分析，过程中注意避光。
（4）流式分析前，在管2中加PI（1∶1000；终浓度1 μg/mL），4℃条件下孵育10 min以检测死亡细胞的比例。