1. 内源性生物活性及其消除生物素是一种辅酶，是在脱羧基酶、羧基转换酶等催化的代谢环节中所产生的羧基中间载体，在应用ABC法染色时会与抗生物素蛋白结合而产生非特异性染色。对含内源性生物素或生物素样物质较丰富的组织，在应用ABC法前，应预先以0.01％的抗生素蛋白和0.01％生物素溶液分别作用20分钟左右，以消除内源性生物素活性。每次作用后应用PBS洗5分钟，更换3次。
此外，最近已有从链霉抗生素蛋白（streptavidin）由于其分子中不含寡糖及等电点接近中性（6－6.5），故非特异性吸附很低。同时链霉抗生素蛋白可与长臂生物素及过氧化物酶结合成复合物，此为SABC（streptavidin-Biotin-peroxidase Complex）复合物，用SABC取代ABC进行标记，可提高灵敏度（比ABC高约20倍）及降低非特异性着色。现在SABC已有成品的试剂盒出售。SABC法的操作步骤基本与ABC法相同，只不过要用SABC代替ABC标记，即将SABC试剂盒中的A液、B液各取10微升，加入1 ml的PBS中（临用前配，配好后立即加入切片中）室温孵育30分钟。此外第一级抗体和第二级抗体的孵育时间均可缩短至30分钟以内，故SABC法是一个快速、简便、敏感及非特异性着色低的检测方法。
2. 生物素制剂间相互亲和性差异很大，因此在应用ABC试剂时，应注意厂家和批号，对购进试剂应进行事先预测，以保证实验结果的稳定性。
3. 标记过程中应始终保持组织切片的湿润。
4. 在DAB显示液中加入镍等金属离子，以使反应产物呈蓝黑色，并用甲基绿复染核，可加强阳性染色的对比度和提高灵敏度。
5. 在用PBS缓冲液冲洗的过程应尽量冲洗完全，片子表面不留杂质。
6. 准确配比抗体的浓度，因为浓度过高和过低都不利反应地进行，在滴加抗体的时候，做到用量少而均匀。
7. DAB是有毒试剂，使用过程中尽量不污染周围环境，并且显色过程中尽量避免DAB见光分解。
8. 滴加每种试剂做到迅速准确，以免片子在反应中干燥。
9. ABC试剂保存温度以4度为佳，据报告保存达两年之久，仍能获得满意效果，而在-20度，生物活性在短期内即被破坏。
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