①测定抗体的间接法 首先将已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反应板的凹孔内。加待测抗体(如需筛选的杂交瘤细胞株的组织培养上清液);保温后洗涤以除去未结合的杂蛋白质,加酶标抗抗体;保温后洗涤,加底物保温30min 后,加酸或碱中止酶促反应,用目测或光电比色测定抗体含量。
②测定抗原的双抗体夹心法 首先将抗原免疫第一种动物获得的特异抗体的免疫球蛋白吸附在反应板凹孔内,洗涤除去未吸附的抗体,加入含有抗原的待测溶液,保温形成抗原抗体复合物,洗涤除去杂蛋白后再加抗原免疫第二种动物获得的特异抗体。由于抗原是多价的并未被抗体饱和,经保温则可形成抗体抗原抗体复合物,洗涤后加酶标抗抗体(抗第二种动物抗体的抗体),保温洗涤后加底物呈色,中止酶活性,比色测定抗原量。由于该法要求抗原是多价的,故此法不能用来测定半抗原或低于二价的小分子抗原。
③测定抗原的竞争法 将含有特异抗体的免疫球蛋白吸附在两份相同的载体甲和乙中然后在甲中加入酶标抗原和待测抗原,乙中只加酶标抗原,其浓度相同于甲中加入的酶标抗原的浓度,保温洗涤后加底物呈色。待测液中未知抗原量愈多,则酶标抗原被结合的量就愈少,有色产物就愈少,以此便可测出未知抗原的量,即等于甲与乙底物降解量的差值。