常用HE染色试剂配制方法临检基础

常用HE染色试剂配制方法：

苏木精—伊红染色法（hematoxylin-eosinstaining），简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。

一、苏木素

（1）Harris苏木素液

配方：labdd.com

苏木精1g；无水乙醇10ml；蒸馏水200ml；钾明矾20g；HgO0.5g

先将苏木精溶于无水乙醇中，备用。把明矾放入蒸馏水，加热溶解，再加入备用的苏木精，煮沸2分钟，先加入极少量的氧化汞（红色、黄色均可），防止氧化过程中液体剧烈沸腾外溢（最好选用比配制容积大一倍烧杯，烧杯比三角烧瓶更不容易外溢），玻棒搅拌，然后，边搅拌边加入氧化汞。一定要注意开始时只能一点点加，直到液体不再剧烈沸腾了，才能增加加入的量，直至加完。加入氧化汞所用的时间和氧化汞溶解的程度、电炉的功率是此配方的关键，也是各人配出来染色效果各不相同的原因，具体要根据每人的习惯进行调整，同时也要根据气温而适当改变加热的时间，加热时间越长，氧化越快。加完后，立即移至冰水中，加速其冷却，静置一夜后，过滤。用前以5%的比例加入冰乙酸。如配好后时间较长，冰乙酸的量可适当多加一点。冰乙酸的量，可直接影响苏木素的着色能力和清晰度。加少了，会造成核浆共染，背景不干净；加多了，核着色能力下降。此液可放置3月至半年左右。

（2）Gill改良苏木素液：

苏木精2g；无水乙醇250ml；硫酸铝17.6g；蒸馏水750ml；碘酸钠0.2g；冰乙酸20ml

先将苏木精溶于无水乙醇，硫酸铝溶于蒸馏水，然后两液混合后加入碘酸钠，最后加入冰乙酸。此液为半氧化进行性苏木素液，不会产生沉淀，氧化膜少，从理论上说染色不需要分化，但如果适当深染分化，染色效果更好。

配制此染液的关键在于碘酸钠的量。一、要根据季节气温的改变，适当调整碘酸钠的量，配方里碘酸钠的量一般只适用于夏天（室温25度），随着气温降低，氧化速度降低，可适当增加碘酸钠的量，室温每下降1度，碘酸钠增加0.01，最多不能超过总量的50%，过量的碘酸钠可使苏木素过氧化，不仅容易坏，而且核浆共染。二、称量一定要准确，很多单位配此染液总是染不上或染的很慢，主要是天平的精确度差，最好选择最小称量度在10mg以下的天平。三、应该观察碘酸钠是否在有效期内，是否潮解。

（3）Ehrlich苏木素液：

苏木精2g；无水乙醇100ml；甘油100ml；冰乙酸10ml；钾明矾2-3g；蒸馏水100ml

先将苏木精溶于无水乙醇，加甘油和冰乙酸待用。然后把钾明矾溶于蒸馏水，再注入待用的苏木精液，用玻棒搅匀，轻盖瓶口（可用棉花），置于日光下，经常开启瓶口并摇匀，约二个月后，颜色变褐色即可使用。

（4）Mayer改良苏木素液：

苏木精2g；无水乙醇40ml；硫酸铝钾100g；蒸馏水600ml；碘酸钠0.4g；冰醋酸20ml

稍加热将硫酸铝钾溶于蒸馏水中，同时将苏木精溶无水乙醇，再将二液混合，加入碘酸钠，充分溶解。此液也是进行性苏木素液，从理论上说染色不需要分化，但如果适当深染分化，染色效果更好。注意事项与Gill改良苏木素液相同。

二、伊红

（1）曙红（水溶性）

配方：曙红（水溶性）2.5g；蒸馏水500ml

水溶性依红酸化配制：

将曙红溶于蒸馏水中，然后加浓盐酸10毫升，充分搅拌，静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次，再过滤；将沉淀物连同滤纸一起放入温箱内干燥，加95%乙醇1000毫升，配成饱和液。使用前再用95%的乙醇1：1～2倍稀释，加入1～2%冰乙酸医`学教育网搜集整理。

（2）伊红（醇溶性）

配方：伊红（醇溶性）；2.5g95%乙醇；1000ml

最后加入冰乙酸几滴，起到促染作用。目前，国内依红偏酸，不仅不需要加冰醋酸，而且根据胞浆的等电点为pH4.7-5.0，应该用当量NaOH或冰醋酸将依红染液调至pH4.5左右。

三、盐酸乙醇分化液：

浓盐酸0.5～1ml；75%乙醇99ml

四、清洗液：

30%盐酸或者用5%苯酚水溶液浸泡24小时，取出后充分水洗。此法可用于盖玻片或载玻片处理。

五、当量盐酸：

配制1N的HCL1000ml，需浓HCL多少ml？82.8ml。