常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——电泳

丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液

一、垂直电泳

如果进行垂直电泳，按说明书先在电泳槽的下槽中装入电极缓冲液。将聚合后的凝胶连同玻璃板一起放入电泳槽中，在上槽中注入电极缓冲液，打开冷却循环系统，连接电源。一般起始电压约为 70~80V，然后不断升高。起始电流可设置为 20~30 mA，取决于凝胶的厚度，大小和样品数。在电泳过程中，应记录电参数的变化，以便以后重复。一般垂直电泳需要 2~6 小时，取决于凝胶孔径，特别是缓冲系统和电参数的选择。

待溴酚蓝前沿到达电泳槽底部（阳极）时，切断电源，关掉冷却循环系统。取出凝胶，准备染色。

二、水平电泳

目前有三种方式进行水平电泳。一是搭接滤纸桥，这是最经典的方式。二是使用半干技术，即用凝胶条或滤纸块的方法。经典方法的操作比较麻烦，电泳时间一般需要 2~4 小时。使用半干技术，操作简便，电泳时间只需 0.5~1 小时左右，并且不影响分辨率。

1. 先将电极缓冲液加在电泳槽两侧的缓冲液槽中，打开冷却循环系统，调节温度在 4~12℃。视室温而定。室温低时，设置较低的温度。反之，室温高时或样品中有尿素时，设置较高的温度。

2. 在冷却板上铺一层煤油或液体石蜡（冬天因液体石蜡太黏稠，不宜使用)，再铺凝胶，并赶出其间的气泡。使凝胶和冷却板有很好的接触，以排除电泳过程中在凝胶上产生的热。

3. 用电极缓冲液浸泡 8~10 层滤纸电极芯，并确保滤纸之间没有气泡。将泡好的电极芯与凝胶搭接，至少重叠 1 cm。为了在凝胶上两电极之间得到均匀的电压梯度，使电泳区带平直，两侧电极芯与凝胶搭接的边缘必须严格平行。电极芯的另一端悬在电极缓冲液中。



4. 打开电源，开始预电泳，以去除凝胶中的不纯物质。预电泳时间一般为 20 分钟，时间过长会产生电解产物。

5. 加样可直接滴加在凝胶表面（不多于 3 μl )，或滴加在加样孔中，或加在合适孔径的滤纸块上。加样后，进行 5~10 分钟的低电压，低电流电泳（原电压和电流的 1/5 到 1/2 )，以使蛋白质分子顺利地进入凝胶。

6. 电泳时按说明书选择合适的电压，电流和功率参数，阳极电泳时，待溴酚蓝前沿接近阳极（阴极电泳时，待指示剂前沿接近阴极）后，关掉电源，停止电泳，准备染色。