1. 96 孔培养板中加入不同稀释度的IFN和标准IFN,每个稀释度设3 孔,每孔50 μl,病毒对照不加IFN 2. 每孔加入100 μl 1.5~2×105 /ml Wish或Hep-2细胞悬液,37℃、CO2孵箱培养6~12 h,使细胞贴壁为单层 3. 每孔加入50 μl含100个TCID50 VSV,细胞对照不加病毒液 4. 根据细胞病变状态,终止培养前3~4 h,加入5 mg/ml MTT,15 μL/孔 5. 加入适量生理盐水,用滴管轻轻吹吸弃去悬浮病变细胞和死细胞 6. 200 μl/孔 二甲亚砜(DMSO),作用10 min 7. 测OD(570nm),表示活细胞中含甲 的量,也可用刚果红摄入法、结晶紫染色法测定IFN对活细胞的保护水平 8. 计算
以保护半数(50%)细胞免受病毒损害的最高干扰素稀释度为1个干扰素活性单位。也可从标准曲线中求得待测样品的IFN活性单位。 展开 |