干扰素释放试验（IGRAs）两种技术原理的比对

目前，临床上应用的结核感染T细胞免疫检测的IGRAs技术有两种：一是ELISPOT；一是酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）。

IGRA-ELISPOT方法（也称为细胞检测）采用的ELISPOT技术是细胞培养技术与ELISA技术结合产生的新技术——固相酶联免疫斑点技术，可从25万个外周血单个核细胞（PBMCs）中检测出每个分泌γ干扰素(IFN-γ)的细胞。结核感染者PBMCs被Mtb特异性抗原刺激后，活化的T淋巴细胞、NK细胞、单核细胞、树突状细胞分泌的IFN-γ被位于细胞下方的包被在膜上的抗IFN-γ单克隆抗体所捕获，洗去细胞后，通过酶联免疫显色，在膜上细胞分泌IFN-γ的相应位置上显现清晰可辨的斑点，通过显微镜人工计数或通过全自动的斑点图像分析仪计数斑点，1个斑点代表1个分泌IFN-γ的细胞，可计算出分泌IFN-γ细胞的频率，这些细胞被称为斑点形成细胞(spots forming cells,SF-Cs)。斑点的强弱和数量反映了机体效应T细胞对刺激物的反应能力和分泌IFN-γ的能力。因此，ELISPOT方法是在单细胞水平检测IFN-γ的分泌情况，重点检测活细胞的功能，即检测单个细胞分泌IFN-γ的能力及分泌IFN-γ的细胞频率，结果直观、清楚;如果检验员认真遵循标准化的操作流程,重复性也较好,可直接反映集体的细胞免疫功能。

2.IGRA-ELISA方法(全血检测)采用的是经典的ELISA技术，可从1ml外周血中检测出细胞分泌的IFN-γ总量。结核感染者外周血经Mtb特异性抗原刺激后，活化的T淋巴细胞、NK细胞、单核细胞、树突状细胞和少量的造血干细胞等分泌产生IFN-γ，通过酶联免疫显色反应，在酶标仪上测定吸光度，根据标准曲线，计算出分泌IFN-γ的量。如果IFN-γ水平升高，既有可能是分泌IFN-γ的效应T细胞数量增加，也有可能是单个细胞的分泌水平增加所致。因此，ELISA方法是在群体细胞水平检测IFN-γ的分泌情况，重点检测IFN-γ的生成量，只是间接反映机体的细胞免疫功能。