应用蛋白质组学技术研究反义CyclinB1的抗肿瘤作用机制

【摘要】背景与目的: 先前研究发现采用反义技术下调cyclin B1 基因表达水平,可产生抗肿瘤的作用, 但其抗肿瘤机制有待进一步研究。本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法来探讨反义cyclin B1 抗肿瘤作用的分子机制。方法: 首先用含有小鼠cyclin B1 反义全长cDNA 的重组质粒转染小鼠CT26 结肠癌细胞, 经双向凝胶电泳( 2-DE) 分离转染组和未转染组的总蛋白, 再用PDQuest 图像分析识别2-DE 胶图像, 然后对差异表达的蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF-MS) 质谱分析, 再经Mascot 软件搜索数据库鉴定这些差异蛋白。最后根据被鉴定肽段的可信度, 从这些蛋白质中选出肽段可信度最高的2 个, 用Western blot 对其丰度差异进行了验证。结果: 初步鉴定出7 个差异表达蛋白, 其中Axin2、CCTθ、DR5 和HPCM27 蛋白质在实验组上调, RFP17、mKIAA1195 及LOC77035 蛋白在实验组下调, 而可信度最高的Axin2 和DR5 的蛋白质表达丰度差异为Western blot 所证实。结论: 多种蛋白质在反义cyclin B1 后表达有明显差异, 这些差异蛋白质参与细胞的增殖、分化、迁移、凋亡及转录调控等多条信号通路, 提示反义cyclin B1 的抗肿瘤机制可能与上述蛋白质的作用有关。