发布时间:2019-05-23 22:30 原文链接: 庚型肝炎病毒抗体检测操作规程

庚型肝炎病毒(HGV)呈世界性分布,与人类急性和(或)慢性肝炎有关。主要以血液途径传播,如输血及血制品、静脉吸毒、使用污染的注射器、经常接触血源等。HGV为单股正链RNA病毒,基因组全长9 392个核苷酸。基因结构分为:5’非编码区、编码区(结构区和非结构区)、3’非编码区,结构区编码核心蛋白和包膜蛋白,非结构区有NSl、NS2、NS3、NS4、NSs等5个区,其中NS2编码蛋白酶。庚型肝炎病毒(HGV)实验室检测指标主要为HGVAb-IgG。 
 
[测定方法]  ELISA法
 
[方法学原理]  庚型肝炎病毒(HGV)特异性抗原预包被于微孔板条上,样品加入已有样品稀释液的反应孔中,在随后的温育过程中,若样品中含特异性抗体(HGVAb—IgG),则该抗体与包被抗原形成抗原—抗体复合物被吸附到微孔板上,再加入酶标记的第2抗体,最终形成抗原—抗体—酶标记第2抗体复合物,洗涤除去未结合的游离酶,加入显色剂后显色。反之,若样品中不含特异性抗体(HGVAb-IgG),则加入显色剂后不显色。
 
[标本准备]  静脉抽血2ml,不抗凝。
 
[试剂]
 
1.包被反应板
 
2.样品稀释液
 
3.阴性对照
 
4.阳性对照
 
5.洗涤剂
 
6.酶标记第2抗体
 
7.显色剂A、B
 
8.终止液
 
[仪器设备]  酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
 
[测定步骤]
 
1.用加样器在微孔反应条中加入样品稀释液,每孔100ul。
 
2.将待测标本各l0ul分别加人已有样品稀释液的各孔中,直接加阴性对照、阳性对照各100u1,设空白对照1孔。
 
3.充分混匀,37℃环境中温育20min。
 
4.倾去内容物,用洗涤液洗板5次,确保每次吸净无残留,全部洗完后在吸水纸上用力拍干。
 
5.各孔加入酶标记第2抗体100fA,振荡混匀。
 
6.倾去