影响正相硅胶反相洗脱色谱仪保留值的因素：
一、色谱流动相保持一定的PH值和离子强度。随着流动相中水的比例增加，洗脱能力减小。
二、流动相中三乙胺浓度升高，对含碱性基团组分的洗脱能力提高，保留时间缩短。三乙胺为阴离子竞争离子，用于竞争硅羟基，以消除硅羟基对生物间的吸附。
三、碱性组分的保留随缓冲盐浓度的增加（离子强度增加）而减少，与离子交换色谱类似。
四、PH值对色谱保留具有两面性。随着PH值的增加，碱性药物的保留先增加后减小。
在实际操作中流动相的PH = 6～7为宜。PH值太低，硅羟基失去离子交换能力。PH值太高，弱碱性药物不易离子化，硅胶在碱性溶液中有一定的溶解度。
五、由于硅氧烷基的疏水特性，非解离型物质的出峰顺序与反相液相色谱类似。
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