徕卡冰冻式切片机切片制样方法

电镜样品制备技术直接影响样品的结构和反差。制备高质量的超薄切片，是发挥透

射电子显微镜优良性能的前提。透射电子显微镜的分辨率理论上可达到o．3nm左右，

但是六于样品制备技术的限制，分辨率很难达到理论值。对于生物样品来说，一般只能

达到2nm的水平。

高质量的超薄切片基本特征：①样品应该能耐受电子束的强烈照射．不变形和升华

等。②能进行屯了染色．提高反差。③l50一100kv加速电压范围内，切片厚度在

50—loonm。④样品必须彻底下燥，以保持电镜L作状态F不损伤。

超揍切片技术包括取样、固定、脱水、渗透、包埋、超薄切片、电子染色、镜检等

制样步骤。其中取样、固定、脱水、渗透、包埋等过程与半博团片制样方法相同，下面

重点介绍超薄切片的准备、超薄切片和电子染色等过程。

一、徕卡冰冻式切片机切片制样步骤

1．铜网清洗：超薄切片要放在载网上才能进行染色等操作，并zui终放到电镜中观察。载网是用元磁性金属材料做成的，厚50Pm，直径一般为3咖，也有2皿的。一般用铜材料，所以又叫铜网。在酶组织化学或免疫细胞化学中要用金网和镍网，载网有各种形状。可根据样品和实验需要，选择载网的材质、形状和孔眼的大小。铜网主要功能是承载支持膜和样品。当受到电子束照射时，支持膜不易破裂*照射到铜网网孔中的电子，穿过样品，通过透镜成像。碰到铜网载条上的电子，被传到地，不参与成像，因此铜网还有把样品上的热量传走，减少样品的热漂移。铜网要经过清洗，方可使用。目前清洗的方法主要有下列几种：①超声波清洗法：将用过的铜网放在盛有95％乙醇的烧杯里，置于超声波清洗器（其内有水）中，在800一1000w下清洗30min。将使用过的铜网上的支持膜及超薄切片等洗去。然后用蒸馏水清洗数次，再在95％乙醇中清洗，zui后放在垫有干净滤纸的培养皿中烘干．镜检，备用。②酸碱清洗法：将用过的铜网放在一培养皿中，倒入一些浓硫酸或浓盐酸，不断地摇动（3—5min），直到铜网发亮为止。然后先用自来水，后用蒸馏水洗几次，再放在95％乙醇中清洗，zui后放到垫有干净滤纸的培养皿中烘下，镜检，备用。也可将铜网放在盛有10％NaoH的小锥瓶或试管中煮沸数分钟，然后用水洗，干燥、镜检，备用。