徕卡生物显微镜VS光学显微镜

徕卡生物显微镜VS光学显微镜

光学显微镜中所用的可见光源是波长为400一800nm的电磁波。波传播的特性之一是衍射。衍射就是波遇到障碍物时能偏离直线传播的性质。根据基础物理知识可知，由于实际光学仪器都有限制光束的“窗口”（光学显微镜中的“窗口”就是物镜边缘所限制的透光范围），它造成的衍射效应会使每个物点形成的像都是有所扩展的衍射光斑。靠得太近的像点彼此重登起来，会使画面中的细节变得模糊不清。光学显微镜中还有一些像差（如球差和色差等）也会使像点展宽，但它们大多可以校矫正。所以衍射差就成了限制光学显微镜分辨率的*重要因素。

根据徕卡生物显微镜成像原理可以得出：一个物点所形成的衍射像斑是一种强度大部分（约84％）集中在中心圆斑，而周围伴有强度逐渐减弱的若干离散同心环的衍射花样。中心圆斑（也称A卸因斑）的半径。约为：n、o．6l扇式中A一显微镜像方所用介质中的光波长；久一物镜光闲（即物境“窗口”）对像点所张的半角．亦稼像方物镜孔径角或电子束半张角。光学仪器中通常采用Rayl出gh判据作为分辨率的标准，即当一个囚斑像约中心刚好落在另一相邻圆斑像的边缘上时，这两个俄恰好能被分辨（图1一1）。因此图像上可分辨的zui小距离众就是Airy团斑的半径。。利用介质中的可见光波长入与真空中可见光波长J的关系入＝4／q（q是物镜像方所用介质的折射率），以及显微镜物镜两侧有关参数的公式Misin氏＝（砌sLn6。）／M（聊是物镜与物之间介质的折射率，gd是物镜光阑对物点所张的半角，灯是显微镜物镑所决定的图像放大倍数），便可以把像上的分辨率品转换成对物方样品的分辨率成，通常被称为显微镜的数值孔径（nu毗icalapenM陀）。

因可见光的波长局限在400nm到800nm之间，故若要缩小可分辨距离久，就必须增大数值孔径。但是为此只能靠提高勒的值，具体做法可以是在载物片与物镜之间加油滴等，但山的zui大值约为L5，zui大张角60约为70‘。而徕卡生物显微镜zui小分辨率极限接近o．2Pm（即200nm）。由于人暇的分辨串约为o．2mm，因此要求光学显微镜的zui高放大倍数也只是1000倍左右。可以更好的看清被检物。以这个性能来衡量，便可得知用光学显微镜看不清真正的细脑膜、细胞器的微结构，也看不见病毒和大分子。