微生物分离纯化实验——平板划线分离法

该方法操作简便，普通用于微生物的分离与纯化。

其基本原理包括两方面：

1. 选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、湿度和氧等要求或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从面淘汰一些不需要的微生物。

2. 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。

米曲霉土样

10％ 酚无菌水链霉素

玻璃涂棒试管无菌三角瓶玻璃珠无菌吸管接种环无菌培养皿显微镜记号笔血细胞计数板

1. 倒平板

按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基名称、土样编号和实验曰期。

2. 划线

在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取上述10^-1的土壤悬液一环在平板上划线（见图 VII-5）。划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。

常用的划线方法有下列二种：

①用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线 3～4 条，再转动培养皿约 70° 角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同样的方法通过第二次划线部分作第三次划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线（图 VII-6，A），划线完毕后，盖上培养皿盖，置于温室培养。

②将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线（图VII-6，B）划线完毕后，盖上培养皿盖，倒置于温室培养。

3. 挑菌落

同稀释涂布平板法，一直到分离的微生物认为纯化为止。

值得指出的是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外还要结合显微镜检测个体形态待征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。