微生物拟核体内体外染色观察实验

实验方法原理

富尔根氏（Feulgen）染色法是根据席夫氏（Schiff）试剂进行的反应而建立的微生物拟核染色法。席夫氏试剂含有碱性复红和亚硫酸，碱性复红与亚硫酸结合后，失去醌式结构而变为无色。当 DNA 经酸作用而生成的醛化合物与席夫氏试剂结合后，使醌式结构恢复，合成一种带紫红色的碱性复红衍生物。此染色法对 DNA 具有特异性。微生物细胞用此法染色后，可在普通光学显微镜下原位观察到细胞内拟核的形态和位置。

富尔根氏染色法主要分两步：

1. 将细胞用 1 mol/L HCI 温和水解，使 DNA 中的嘌呤碱与戊糖分开，放出戊糖的醛基；

2. 放出的戊糖醛基与席夫氏试剂作用后呈紫红色。

实验材料 酿酒酵母

试剂、试剂盒 1 mol L HCL2% 锇酸Schandiun 固定液亚硫酸水溶液席夫氏试剂

仪器、耗材 锇酸蒸气瓶

实验步骤

1 取培养 8～10 h 的酿酒酵母涂片，室温下风干。

2. 将涂片置于盛有 2% 锇酸的蒸气瓶口上，用锇酸蒸气固定 5 min，然后放入加热至 60 ℃ 的 Schandium 固定液中 10 min。

3. 用水冲洗固定后的标本，然后放在 60 ℃ 1 mol/L HCl 中水解 8 min，水洗。

4. 用席夫氏试剂作用 30～40 min。

5. 由席夫氏试剂中取出放在亚硫酸水溶液中洗 5 min。

6. 由亚硫酸水溶液中取出水洗，干燥后，用油镜观察。