微生物染色液配制及染色法

 1、美蓝染色法

1.1 吕氏碱性美蓝染色液美蓝 0.3g 95%乙醇 30mL 0.01%氢氧化钾溶液100mL将美蓝溶解于乙醇中,然后与氢氧化钾溶液混合.

1.2 染色法将涂片在火焰上固定,待冷.滴加染液,染1～3min,水洗,待干,镜检.

1.3 结果菌体呈蓝色.

2、革兰氏染色法

2.1 结晶紫染色液结晶紫 1g 95%乙醇 20mL1%草酸铵水溶液 80mL将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合.

2.2 革兰氏碘液碘 1g碘化钾 2g蒸馏水 300mL将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300mL.

2.3 沙黄复染液沙黄 0.25g 95%乙醇 10mL蒸馏水 90mL将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释.

2.4 染色法

  2.4.1 将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗.

  2.4.2 滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗.

  2.4.3 滴加95%乙醇脱色,约30s；或将乙醇滴满整个涂片,立即倾去,再用乙醇滴满整个涂片,脱色10s.

  2.4.4 水洗,滴加复染液,复染1min.水洗,待干,镜检.

2.5 结果革兰氏阳性菌呈紫色.革兰氏阴性菌呈红色.注：亦可用1:10稀释石炭酸复红染色液作复染液,复染时间仅需10s. 

3、耐酸性染色法(萎－倪二氏法)

3.1 石炭酸品红染色液碱性品红 0.3g 95%乙醇 10mL 5%酚水溶液 90mL将品红溶解于乙醇中,然后与酚溶液混合.

3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸 3mL 95%乙醇 97mL

3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液.

3.4 染色法

  3.4.1 将涂片在火焰上加热固定,滴加石炭酸品红染色液,徐徐加热至有蒸气出现,但切 不可使沸腾.染液如因蒸发减少时,应随时添加.染5min,倾去染液,水洗. 

  3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色,直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定,一般为1～3min),水洗.

  3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液,复染30s～1min,水洗,待干,镜检.

3.5 结果：耐酸性细菌呈红色,其他细菌、细胞等物质呈蓝色.

4、柯氏染色法

4.1 染色液

  4.1.1 0.5%沙黄液.

  4.1.2 0.5%孔雀绿液.

4.2 染色法

  4.2.1 将涂片在火焰上固定,滴加0.5%沙黄液,并加热至出现气泡,约2～3min,水洗.

  4.2.2 滴加0.5%孔雀绿液,复染40～50s.水洗,待干,镜检.

4.3 结果布氏杆菌呈红色,其他细菌及细胞呈绿色.

5、奥尔特氏荚膜染色法

5.1 染色液沙黄 3g蒸馏水 100mL用乳钵研磨溶解.

5.2 染色法将涂片在火焰上固定,滴加染色液,并加热至产生蒸气后,继续染3min.水洗,待干,镜检.

5.3 结果炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色,荚膜呈黄色.

6、瑞氏染色法

6.1 染色液瑞氏色素 0.1g甲醇 60mL用乳钵研磨溶解.

6.2 染色法

  6.2.1 涂片待自然干燥后,滴加染色液,固定1min.

  6.2.2 加入等量蒸馏水(pH6.5),染色3～5min.

  6.2.3 用蒸馏水冲洗,待干,镜检. 

7、鞭毛染色法

7.1 染色液的配制

  7.1.1 甲液：称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g,溶于100mL蒸馏水中,待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL.

  7.1.2 乙液：称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中.在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液,到出现沉淀后,再滴加使其变为澄清,然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中,至出现轻微雾状为止(此为关键性操作,应特别小心).滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时,要边滴边充分摇荡,染液当天配,当天使用,2～3d基本无效.

7.2 染色法在风干的载玻片上滴加甲液,4～6min后,用蒸馏水轻轻冲净.再加乙液,缓缓加热至冒汽,维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面).在菌体多的部位可呈深褐色到黑色,停止加热,用水冲净,干后镜检,菌体及鞭毛为深褐色到黑色.

8、碱性复红染色法

    将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中,然后用蒸馏水稀释至100mL.如有不溶物时,可用滤纸过滤,或静置后取上清液备用.注：本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色,藉以与蜡样芽胞杆菌相区别.