发布时间:2020-08-17 23:12 原文链接: 微量免疫电泳实验

实验方法原理 免疫电泳法(immunoelect rophoresis)是把蛋白质电泳分离技术(琼脂电泳)和免疫学检测技术(双向扩散)结合起来的检测法。此法在微量的基础上具有分辨率高,灵敏度高, 时间短等优点, 是很理想的分离和鉴定蛋白质混合物的方法。用于抗原、抗体定性及纯度的测定。在临床诊断方面也有应用价值。

(来源:物化学与分子生物学实验指导,邵雪玲等,武汉大学出版社,2003)

实验材料 人IgG 兔抗人IgG

试剂、试剂盒 琼脂 巴比妥钠 牛血清白蛋白

仪器、耗材 电泳仪 水平电泳槽 打孔器 微量加样器 牙签 载玻片 恒温水浴 小刀

实验步骤

1. 琼脂板的铺制

 

如下图铺好琼脂板,然后按下图打孔划槽,电泳时不要把槽中的琼脂挑出来(槽的两纵向平行边先不划开)。

 

2.  加样

 

使琼脂板的上孔里充满抗原溶液,下孔里充满着指示蛋白。

 

3. 电泳

 

同上操作方法,调电流强度为2~4 mA/cm。当指示蛋白质到达滤纸的边缘时就可以停止电泳。一般需要40~60 min。

 

4. 扩散 


电泳结束后,从琼脂板中间的槽里用牙签挑出琼脂凝胶,并加入免疫血清。将琼脂板置温盒内(或培养皿中),盖好盖子放置一夜。次日可以观察到凝胶内出现的沉淀线。一般情况下每一沉淀线即代表一种抗原成分。根据沉淀的数量、位置可以判断抗原的纯度以及抗原蛋白质的种类。微量免疫电泳常用于分析样品的血清成分。

 

5. 观察 


免疫电泳的图谱可以直接观察到抗原抗体沉淀线,也可以用0.1%的氨基黑染色后观察。如果需要保存可以拍照。