微量制备毛细管电泳实验——单次分离

多肽：ACTH 4-10

4:1（V／V）0.5 mol／L 磷酸钠缓冲液（pH 2.50）／乙烯乙二醇0.1 mol／L 氢氧化钠

150 μm 内径的融合硅毛细管柱CE 仪器锥形微量瓶

1. 制备多肽混合物和预处理柱子（见多次分离步骤 1 和 2）。

2. 在 0.5 lb/in²，10 s 内用低压注射上样 0.1 μl 多肽混合物。

3. 使用以下条件分离多肽混合物：

电解质：0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.30

探测波长：200 nm

温度：25℃

电压：7.5 kV

分部大小：每收集管 3 min

4. 用一系列的含 10 μl 4:1（V/V）0.5 mol/L 磷酸钠缓冲液/乙烯乙二醇的微量锥形瓶替换标准的出口池（正极）。收集 3 min 的流分于每一个瓶子用于分析分离的长度。

5. 用分析分离方法（见解析多肽分离实验）筛选含多肽的流分。

对于单收集方法，CE仪器必须能有效地控制在高电压水平时的毛细管温度，因为高电压水平是电泳所必需的。鼓风式冷却通常不适合该目的。