微量血锌正常参考值及火焰原子吸收法测定

   在我国锌缺乏现象相当普遍。血清锌浓度测定是当前世界公认的锌缺乏诊断试验。如果能够排除感染、发烧、创伤等应激反应,血清锌测定值可以反映体内锌总体水平。但这种方法用血量较多,儿童及其家长不愿接受。头发锌含量测定曾作为诊断锌缺乏的常用方法。头发样品的采集、运送、贮存、检测都较方便,易为儿童及其家长所接受。但洪昭毅等曾同时测定467例小儿血清和头发锌含量,结果显示二者无相关性。头发锌含量测定只能作为群体营养状况及环境污染的监测指标,不能作为锌缺乏的诊断指标。近年来,有学者相继探索微量、简易、快捷、灵敏、可靠的锌缺乏诊断方法。本室将有关报道加以综合、改进,建立了高灵敏微量进样火焰原子吸收法测定微量全血锌的方法,并应用该方法进行中国公共卫生专项调查,以期制订正常参考值。现报告如下。
    1 　对象与方法
    1.1 　对象　江西医学院护理系一年级120名女生,平均年龄18.6 岁,zui小年龄17岁（16人） ,zui大年龄21岁（2 人） 。采血时皆无感染发烧等急性病表现,亦无严重慢性疾病。
    1.2 　方法　
    1.2.1 　静脉血采集　于早晨空腹时采集,血样离心分离血清,置冰箱备测。
    1.2.2 　全血样采集　于采静脉血的同时,用一次性毛细管取同一人指端未稍血20μl注入盛有1ml稀释液的聚乙烯塑料管中,并将附于毛细管壁的血洗净,加盖封紧置冰箱备测。
    1.2.3 　稀释液及标准液配制　配制0.1 %TritonX-100水溶液,用于稀释血样,并起增敏和抗干扰作用。用优质纯ZnO配制浓度为1000mg/L的Zn标准储备液（含0.1mol/ LHNO3） ,放于冰箱备用。测试前用0.05 %TritonX-100 逐级稀释配制标准工作液。
    1.2.4 　仪器测定条件　（1） 血清锌测定:所用仪器为原子吸收分光光度计, 采用火焰法。波长213.8 nm ,灯电流7mA ,狭缝1nm ,燃烧器高度7mm ,空气流量6.0L/ min ,乙炔流量1.0L/ min。（2） 微量全血锌测定:设备条件同上。
    1.2.5 　测定方法　（1） 血清锌测定:取静脉血离心分离血清。取血清1ml加0.1mol/ L HNO34 ml混匀。将仪器按1.2.4 （1）所述条件设定调试好。用重蒸馏水调零。将空白液及系列标准液依次喷入火焰,记录吸光度,绘制标准曲线。再将样品喷入火焰,记录吸光度,从标准曲线上查得待测样品的浓度。
    （2） 微量全血锌测定:向盛有全血的聚乙烯管中加入测试稀释液1 ml ,摇匀上机测试。即按选定的仪器测定参数,分别将标准溶液和试样溶液直接喷雾测定吸光度。标准溶液（标准工作液系列） 浓度为:0 ,50 ,100 ,150 ,200μg/ L 。曲线绘制及结果计算由仪器配套计算机自动完成。
    1.2.6 　确定正常参考值的方法　在比较均数加减标准差法与百分位数法的基础上,从诊断实际出发制订正常参考值。
    2 　结　果
    2.1 　血清锌及全血锌测量值　样本量为120例。血清锌均数为11.9μmol/ L ,标准差为3.49 ,中位数为11.50 。全血锌均数为66.54μmol/ L ,标准差为8.52 ,中位数为67.60μmol/L 。第5 百分位血清锌值为7.36μmol/ L , 30 百分位数为9.50 ; 40 百分位数为10.42 ; 5 百分位全血锌值为50.48μmol/ L ,30 百分位数为62.48 ;40 百分位为64.94 。
    2.2 　分布检验　血清锌测量值呈正偏态尖峭峰分布。全血锌测量值呈负偏态尖峭峰分布。
    2.3 　火焰原子吸收光谱法测定微量全血锌的灵敏度与特异度　以火焰原子吸收光谱法所得血清锌测定值作为“金标准”,即血清锌测定法判断为阳性者属于真阳性（病人） 评价火焰原子吸收光谱法测定微量全血锌（简称微量全血锌测定法）的灵敏度与特异度。当血清锌测定法阳性（锌缺乏） 判断标准为9.50μmol/ L ,微量全血锌测定法阳性（锌缺乏）判断标准为62.50μmol/L时, 后者的灵敏度为82.05% ,特异度为87.65 %。当血清锌测定法阳性判断标准为10.10μmol/ L ,微量全血锌测定法阳性判断标准为64.30μmol/ L时,后者的灵敏度为92.50 % , 特异度为87.5 % , 假阴性率（漏诊率） 仅7.5 % ,假阳性率（误诊率） 仅12.5%。当血清锌测定法阳性判断标准为10.42μmol/ L ,微量全血锌测定法阳性判断标准为64.94μmol/ L时,后者的灵敏度降为87.8 % ,特异度降为86.07 %。
    3 　讨　论
    正常参考值的常用表示方法是均数加减标准差法。应用该表示方法的前提是,诸测量数据的频数分布呈正态。如前所述,微量全血锌测定法诸测量数据呈偏态分布。此外,应用这种表示方法都假定患病率为5 % ,这与实际情况不符。正常参考值的另一常用表示方法是百分位数法。这种表示方法同样假定锌缺乏患病率为5 %。我们应用这一标准在人群中进行锌缺乏筛选,其结果与临床表现的符合率很低。所以这两种方法均不适用于制订全血锌的正常参考值。
    根据文献资料和实验,取第30百分位数血清锌测量值作为阳性分界值即“金标准”,评价第30 百分位数微量全血锌测量值（待评价标准） 的灵敏度和特异度。结果显示,灵敏度为82.05 % , 特异度为87.65 %。将待评价标准改为64.30μmol/ L , 则灵敏度提高至92.50 %（ 漏诊率仅为7.50 %） ,特异度（ 87.50 %）仍处于较高水平, 误诊率仅12.5 %。若将待评价指标改为第40 百分位数测量值64.94μmol/L ,则灵敏度降至87.80 % ,特异度降至86.07 %。所以,火焰原子吸收光谱法测定微量全血锌其正常参考值下限应订为64.30μmol/ L 。