一、原理
植物进行呼吸时放出CO2,计算一定的植物样品在单位时间内放出CO2的数量,即为该样品的呼吸速率。呼吸放出的CO2可用氢氧化钡溶液吸收,实验结束后用已知浓度的草酸溶液滴定剩余的碱液,从空白和样品二者消耗草酸溶液之差即可计算出呼吸过程中释放的CO2的量。
二、材料、设备仪器及试剂
(一)材料:发芽的小麦种子或其它萌发的种子。
(二)仪器设备:1.呼吸测定装置;2.天平;3.钟表;4.酸式及碱式滴定管;5.温度计
(三)试剂:1. 0.05mol/L 左右的Ba(OH)2:称取Ba(OH)2 8.6g溶于1000ml蒸馏水中;2. 1/44mol/L 草酸溶液:准确称取重结晶的H2C2O4.2H2O 2.8651g溶于蒸馏水中定容至1000ml,每ml相当于1mgCO2;3. 酚酞指示剂:1g酚酞溶于100ml 95%乙醇中,贮于滴瓶中。
三、实验步骤
1. 取500ml广口瓶一个,瓶口瓶用打有三孔的橡皮塞塞紧,一孔插一盛碱石灰的干燥管,使呼吸过程中能进入无CO2的空气,一孔插温度计,另一孔直径约1cm,供滴定用,平时用一小橡皮塞塞紧,瓶塞下面挂一铁丝纱小篮,以便装植物样品,整个装置即谓“广口瓶呼吸测定装置”。
2. 在瓶口准确加入约0.05mol/L 的Ba(OH)2溶液20ml,立即塞紧橡皮塞(不带小篮),充分摇动广口瓶2min,待瓶内CO2全部被吸收后,拔出小橡皮管塞,加入酚酞指示剂2滴,把滴定管插入孔中,用标准草酸溶液进行空白滴定,直到红色刚刚消失为止。
3. 倒出废液,用无CO2的蒸馏水(煮沸过的)洗净后,重加上述Ba(OH)2溶液20ml,同时称取植物样品5~10g,装入小篮子中,挂于橡皮塞下,塞紧瓶塞,开始记录时间,经过20~30min,其间轻轻摇动数次,使溶液表面的BaCO3薄膜破坏,有利于充分吸收CO2。然后用草酸滴定,方法如前。(注意:防止口中呼出的气体浸入瓶内!)
四、结果计算
呼吸速率(mgCO2/g(FW)/h)=(A-B)×1/(W×t)
上式中,A:空白滴定用去的草酸量(ml);B:样品滴定用去的草酸量(ml);W:样品鲜重(g);t:测定时间(h)。每毫升1/44mol/L 的草酸相当于1mgCO2。
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