为了提高转化效率，实验中要考虑以下几个重要因素：
(1)细胞生长状态和密度 不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌，最好使用从单克隆菌落制备的新鲜菌液，细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，可通过监测培养液的 OD600来控制。DH5α 菌株的OD600为0.5时，细胞密度在5×10⁷个/mL 左右(不同的菌株 情况有所不同),这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。
(2)质粒的质量和浓度 用于转化的质粒DNA 应主要是超螺旋态 DNA(cccDNA) 。 转化效率与外源DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 的量过多或体积 过大时，转化效率就会降低。1ng 的 cccDNA 即可使50μL 的感受态细胞达到饱和。 一般情 况 下 ，DNA 溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%。
(3)试剂的质量 所用的试剂，如CaCl₂ 等最好是最高纯度的，并用超纯水配制，过滤除菌后分装保存于4℃冰箱备用。
(4)防止杂菌和杂 DNA 的污染 整个操作过程均应在无菌条件下进行，所用器皿，如离心管，tip 头等最好是新的，并经高压灭菌处理，所有的试剂都要灭菌，且注意防止被其他试剂、DNA 酶或杂DNA 所污染，否则均会影响转化效率，为以后的筛选、鉴定带来不 必要的麻烦。
