戴安液相色谱法分析烟草中绿原酸和芦丁含量

烟草中含有多种多酚类化合物，为烟草产生香味的主要 前体物，其种类和含量随物种和地域分布存在密切关系， 其中绿原酸和芦丁占有主要部分 [1]。现代药理学研究表明 绿原酸、芦丁等多酚类化合物具有抗氧化作用，可降低 血管脆性，增加细胞膜渗透性能，提高细胞排泄生理体 液等功能，已广泛用于医药、食品等行业 [2,3]。烟草中多 酚类化合物的检测方法有分光光度法、气相色谱法、液 相色谱法等。其中分光光度法专属性差且只能测定其近 似总量；气相色谱法则需要将样品进行衍生后才能分析； 传统液相色谱法需要用有机溶剂进行脱脂处理，样品处 理较繁琐 [4]

本研究对烟草中 2 种多酚化合物提取方法进 行了优化设计，并采用反相液相色谱方法测定烟草中绿 原酸和芦丁含量。其分析结果与发表相关标准的方法 [5] 相比，该方法灵敏度高、检出限低、峰形对称、分析时 间短。

仪器配置 Thermo Ultimate 3000 系统： 泵：LPG-3400 自动进样器：WPS-3000 柱温箱：TCC-3000 检测器：DAD-3000 色谱软件：Chromeleon 6.8

测试条件 色谱柱：Acclaim 120® C18, 4.6×150mm, 5μm, PN:059148， SN:003887 流动相：A：0.1% 磷酸溶液，B：甲醇 梯度程序：0~10min: 20% → 30%;10~25min:30% → 90%B; 25~27min:90%B;27~28min:90% → 20%B;28~32min: 20%B

进样量：10µl 柱温：35℃ 检测波长：325nm 样品处理 精密称取 0.5g 样品粉末置于 50ml 量瓶中，加入 55% 甲醇 20ml，超声提取 30min，放置室温，过滤，取 2ml 滤液用 20% 甲醇稀释至 10ml，摇匀备用。

结果与讨论

提取条件筛选 通过查阅文献[6~8]，对提取溶剂浓度和用量进行了考察 (表1) 表 1. 提取实验方案 序号 甲醇浓度 (%) 体积 (ml) 1 30 10 2 30 20 3 30 30 4 50 10 5 50 20 6 50 30 7 70 10 8 70 20 9 70 30 结果显示，当甲醇浓度为 50% 时，两种成分的含量达到值，增加甲醇浓度时，绿原酸含量不再增加，芦丁 含量会有降低趋势。当溶剂体积为 20ml 时，两种成分含 量达到值，再增大溶剂用量，二者含量不再增加。 通过数据分析 ( 见图 1)，决定采用 55% 甲醇 20ml 程度提取烟草中的绿原酸和芦丁两种成分。