自2021年7月20日南京禄口机场核酸检测呈阳性以来,短短两周时间南京就已确诊300多例,经过序列比对发现与印度变异菌株“德尔塔”高度同源,疫情迅速在江苏、河南、湖南等地蔓延。
“德尔塔”传播力比以往病毒高一倍,载量更是高达以往病毒的1260倍。各省市迅速响应,大量进行核酸检测,对核酸提取和检测原料形成很大供给压力。
翌圣生物科技(上海)股份有限公司(以下简称“翌圣生物”)实行上海、武汉双基地生产,并在全国布局上海、北京、武汉、深圳、广州、成都等多个仓储物流中心,多点供货,统筹调度,降低因疫情导致的生产、配货等供货风险。翌圣生物全力保障高品质分子酶原料稳定供应,为抗“疫”之战提供弹药。
翌圣生物是核酸检测原料酶的生产研发企业,其上海总部拥有多个上百升发酵设备和大型纯化设备,武汉分公司武汉翌圣更是全国大型分子酶生产基地,新冠检测原料酶日产量达100万人份,同时备有大量现货库存,随时准备着为抗疫之战提供弹药。以下是翌圣生物的几个核酸检测核心原料酶。
高纯度:纯度>95%,无核酸酶残留,宿主gDNA残留量低
良好的批次稳定性:严苛的生产流程和质检标准,保证不用批次产品性能稳定性
稳定的生产产能:大规模生产体系,单批次产能达g级;稳定供应,货期短
1、高纯度
图2. 上样量1-5 μL,经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色,Hieff® Direct Taq DNA Polymerase 纯度大于95%。
2、无核酸酶残留
图3. 50 μL反应体系中,加入10U Hieff® Direct Taq DNA Polymerase,与500 ng λ DNA/Hind III酶切产物,在37℃孵育4h,酶切产物带型无变化,无核酸酶残留。
3、无切口酶残留
图4. 10μl反应体系,取10U非热启动Taq酶,与500ng IL23R 超螺旋质粒在37℃孵育4h;电泳观察带型变化。结果显示无切口酶残留,表明本品无切口酶残留。
4、磷酸酶残留测试合格
表1. 磷酸酶活性(pNPP,缓冲液)-200 μL的反应缓冲液含1 M二乙醇胺 、0.5 mM MgC12、2.5 mM对硝基苯磷酸盐(pNPP)以及至少40 μL标准Taq(不含Mg2+);通过分光光度法测定并且在37 ℃下4小时可产生<0.0001单位的碱性磷酸酶活性。10U三批次D-Taq酶磷酸酶残留均小于0.0001U。
5、热稳定性好
表2. 将待检酶94℃加热30min、60min之后测定酶活。94℃加热1小时仍具有不低于50%的酶活。
6、扩增长度测试合格
图5. 扩增2kb和5kb的片段,电泳检测。
7、大肠杆菌DNA残留检测合格
图6. 50 μL体系中,加入2U的酶,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色。无扩增条带。
10U热敏UDG中大肠杆菌基因组残留低于10拷贝
无核酸酶残留
尿嘧啶是此酶识别的唯一碱基
图片
1、高纯度
图7. 上样量为5-20 μL,经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色,纯度大于95%。
2、无核酸酶残留
图8. 在50μL反应体系,取1U酶,与500ng lambda DNA/Hind III酶切产物在37℃孵育4h;电泳观察带型变化。结果显示带型及条带深浅与对照一致,无核酸酶残留。
3、无切口酶残留
图9. 在10μL反应体系,取1U酶,与500ng IL23R 超螺旋质粒在37℃孵育4h;电泳观察带型变化。结果显示,带型及条带深浅与对照一致,无切口酶残留。
4、无RNase残留
图10. 10μl反应体系,取1U酶,与500 ng 293T RNA 在37℃孵育4h;电泳观察带型变化,与阴性带型一致-合格。
Hifair® V Reverse Transcriptase 是在 Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与 Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达 60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的 RNA 模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® VReverse Transcriptase 合成全长 cDNA 的能力也有了提升,可扩增长达 10 kb 的 cDNA。
产品特点
兼容性:适合不同GC含量、不同表达丰度基因逆转录
灵敏度高
1、高纯度
图11. 上样量2 μg,经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色,根据条带分析纯度。纯度大于95%。
2、核酸内切酶残留和核酸外切酶残留
图12.在200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA,37℃下孵育1 h,结果显示无核酸内切酶残留。在200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ,37℃下孵育1 h,结果显示DNA的电泳谱带不发生变化,无核酸外切酶残留。
3、无切口酶残留
图13. 在10μl反应体系,取1000U 反转录酶,与500ng IL23R 超螺旋质粒在37℃孵育4h。结果显示电泳观察带型,无变化无切口酶残留。
4、无大肠杆菌基因组残留
图14. 在50 μL体系中,加入200U的酶,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色。结果显示无扩增条带即无大肠杆菌基因组残留。
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