以下是一套较为完整的微生物絮凝剂发酵罐灭菌操作规范示例:
一、灭菌前准备
设备检查与清洁
检查发酵罐罐体有无破损、渗漏,各阀门、接口是否正常且能密闭良好,搅拌、温度、压力等控制系统功能正常。
彻底清洁发酵罐内部,包括罐壁、搅拌桨、挡板等,使用合适的清洁剂去除残留的物料、污垢等,然后用清水冲洗干净并确保无清洁剂残留。
检查并清理蒸汽发生器(若为蒸汽灭菌),确保其水位合适、能正常加热产生蒸汽且蒸汽输送管道畅通、无泄漏。
仪器与部件准备
从罐体上取下需要单独处理(不适合高温高压灭菌等)的部件如:
温度传感器(若不耐受高温高压),妥善放置。
溶解氧(DO)电极、pH电极等,按相应规范进行处理(如有的电极需要保护液保护等) ,并标注好已灭菌和未灭菌。
准备好合适的密封件(如硅胶垫等),若有损坏或老化及时更换。
检查过滤器完整性(若有空气过滤器等),如有损坏及时更换滤芯。
二、装载与密封
安装好搅拌系统等内部部件(确保安装到位和稳固)。
将配置好的待发酵物料通过合适的无菌管道加入发酵罐内,注意避免污染,加液量一般不超过发酵罐总容积的一定比例(如80% ,防止灭菌时溢出)。
安装好所有的管道接口、阀门等,拧紧密封。
关闭发酵罐的所有出气口(除必要的排气口外)、进料口等;关闭所有与发酵罐连接的不必要的管道阀门。
三、灭菌操作(以蒸汽灭菌为例)
夹层预热
打开蒸汽发生器,产生蒸汽。
打开夹层进汽阀门,打开夹层排汽阀门,使蒸汽进入发酵罐夹层进行预热升温。
打开排气阀,排出冷空气,观察温度上升情况,待温度上升至95 - 98℃时关闭夹层蒸汽 ,停止搅拌(如果搅拌在夹层预热阶段开启的话)。
管道及罐体内部灭菌
打开罐底侧面蒸汽阀、罐底放料阀(此阀顺时针开,逆时针关,与普通阀门正好相反),蒸汽进入发酵罐。微开取样阀等。
关闭空气进气阀(黄色手柄),打开蒸汽进汽阀(红色手柄),使蒸汽进入空气过滤器(若有)及空气管道。先从尾阀排出少量冷凝水,关小尾阀,打开过滤器下面的进汽阀,蒸汽从空气管进入发酵罐。
控制排气阀大小、各进汽口蒸汽量,将温度控制在灭菌温度(通常121 - 125℃),罐内压力控制在一定范围(如0.1 - 0.15MPa),维持一定时间(通常20 - 30分钟)。
四、冷却阶段
灭菌时间达到后,关闭所有蒸汽阀门。
待压力下降至0.2 - 0.3kg/cm²时,缓慢打开空气阀及尾阀,吹干过滤器等部件(若有)。
打开冷却水及相关阀门,将控制程序切换到冷却模式(自动控温),使罐内迅速降温。
待罐压降至0.2 - 0.3kg/cm²时,打开空气进气阀,保持罐内压力(若需要保持正压)。
五、灭菌后处理
检查与恢复
检查罐体及各部件在灭菌冷却后有无变形、损坏、泄漏等异常情况。
将之前取下的温度传感器等部件重新正确安装。
重新标定pH电极、DO电极等需要标定的仪器。
清洁与消毒(若有必要)
对发酵罐周围环境进行清洁打扫。
若在冷却过程中有被污染风险等特殊情况,可使用合适的消毒剂对发酵罐外表面及相关阀门接口等进行擦拭消毒。
六、记录与确认
详细记录整个灭菌过程中的温度、压力、时间等关键参数。
操作人员确认灭菌效果良好,签字确认,以便后续追踪和质量控制。
安全注意事项
操作人员必须经过培训,熟悉灭菌流程和设备操作。
在开启蒸汽阀门、接触高温部件等操作时,应佩戴防护手套等防护用品,防止烫伤。
注意蒸汽压力不要超过设备允许的最大压力范围,防止设备损坏和爆炸等危险。
冷却过程中防止因压力骤降形成负压而导致罐体损坏或外界污染物吸入。
对废弃的密封件、过滤器滤芯(若更换)等妥善处理,避免污染环境。
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