1. 支原体污染预防
根据可能的支原体污染来源,在体外细胞培养过程中,要严格控制环境污染;严格实验操作;细胞培养基和实验器材、耗材要保证无菌;在不影响实验结果的前提下,可在细胞培养基中加入适量的特定抗生素;发现支原体污染后,要清除支原体,防微杜渐。
2. 支原体污染的去除及预防
因为支原体没有细胞壁,一般用于细胞壁合成的抗生素对支原体没有作用,如青霉素、万古霉素多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍没什么效果。对支原体Z有抑制活性及常用于支原体去除的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮。在低浓度时,这些抗生素不会产生耐药性,且对哺乳动物细胞的毒性较小。四环素和大环内酯能结合30S和50S核糖体亚基,从而抑制支原体蛋白质合成,喹诺酮抑制DNA旋转酶。因此可以在细菌DNA复制及蛋白质合成两个层面上抑制细菌生长,明显增强除菌效果。
3. 支原体去除试剂选择
选择支原体去除试剂需要注意几个关键几点:
①细胞毒性小,毒性大的试剂在去除支原体的同时,会杀死细胞;
②支原体去除效果,选择广谱试剂,去除多种支原体,以及细菌,真菌等;
③操作简便,没有二次污染;
要考虑操作使用是否方便,因为如果使用起来比较麻烦,首先是费时费力,另外可能会带来二次污染。
Quick Cell支原体预防及去除试剂和Cellmaxin都是从蛋白和DNA两个层面去除支原体,抗菌谱广。不同在于Quick Cell的使用者可以灵活选择单独或联合使用两种成分,分别或同时在蛋白或DNA层面去除支原体污染,细胞毒性更小。作用周期1-2周,支原体去除率大于92%。去除预防兼顾
BM-Cyclin包含泰妙菌素(BM-Cyclin 1)和二jia胺四环素(BM-Cyclin 2)两种成分,抑制支原体及细菌生长,高效去除培养细胞中已感染的支原体。适用于多种培养细胞,无明显副作用,又不影响细胞本身的代谢,而且处理过的细胞不会重新感染支原体。BM-Cyclin需联合使用,作用周期2周,可消除80%以上的支原体。不确定能否预防。
BIOMYC-1基于抗生素泰妙菌素,由真菌pleurotus mutilus 产生。 BIOMYC-2基于二jia胺四环素,四环素衍生物。此两种抗生素溶液通常按先后联合使用2-3次循环约一周以上,可取得良好的效果。BIOMYC-3 基于抗生素环丙沙星,属于氟喹酮类。许多支原体被证明对BIOMYC-3敏感,需要根据支原体种类使用。处理周期2周,能去除90%的支原体。是否可以预防支原体目前还不能确定。
Plasmocin™ prophylactic和Plasmocin™ treatment也是两种抗生素的混合物,包含两个针对支原体的有效成分,作用于蛋白质合成和DNA复制阶段,对许多细菌和真核细胞则没有影响。作用周期2周,去除效率未知。有两个浓度包装,去除用高浓度,预防用低浓度。
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