放射自显影原位杂交玻片的复染和压片固定实验

水化并显影的原位杂交玻片

吉姆萨染色液（Fisher) 710 mmol L磷酸钠缓冲液 pH 6.8 (500 mmol L原液按1:50稀释） 50%、70%、95% 和100% 乙醇、二甲苯 封片介质为Permount (Fisher)或 Gelvatol (现称 Airvol 来自Air Productsand Chemicals)

玻璃染色盘 13个平头镊 Whatman 3 MM 滤纸条 42℃温箱

1) 将显影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盘中。

2) 在染色盘中，准备以下各组液体：

1个盘：用pH 6.8 10 mmol/L磷酸钠缓冲液配制的25倍稀释的吉姆萨染液；

3个盘：水。

脱水系列溶液（可重复使用）：

3个盘：分别盛50%、70%和95%乙醇；2个盘：盛有100%乙醇；

3个盘：盛有二甲苯。

3) 在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s (依染色时间决定染色的强弱）。将玻片在水中浸泡3次，每次2 min。

4) 用乙醇系列溶液脱水，每盘中浸泡2 mm,将玻片移至二甲苯盘中，每次浸泡2 min,共 3 次。应注意进行脱水和在二甲苯中平衡的操作，因Permoimt不与水或乙醇相溶。

5) 在通风橱中，按如下操作压片固定：用一平头镊（拿在左手），从二甲苯中取出一块玻片，夹住磨面端置水平。加4滴Permmmt于另一端（切片所处位置），右手拿一干净的盖玻片，很缓慢地放在载玻片上。在加压片固定介质和盖玻片前，勿使玻片变干，因微小气泡会造成入为假象。

如用Gelvatol，对切片无需进行脱水处理。例如，在免疫组化试验中。以Gelvatol进行压片固定 按如下进行：滴1小滴Gelvatol于盖玻片上，小心将载玻片贴于液滴上，防止产生气泡。避免施压，否则可能压坏样本，室温下放2〜4 h使之凝固。

6) 用3 MM滤纸，沿盖玻片边缘，小心吸去多余封片介质/二甲苯，并擦拭载玻片背面（勿擦拭盖玻片）。勿将玻片直立存放于玻片中，因此时封片介质尚未凝固。

7) 将玻片平放于一硬纸盘上，置42℃温孵箱2天使之凝固。

8) 以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳、染料和封片介质。用镜头纸或普通棉纸 擦去尘埃。放入玻片盒，必要时，在载玻片上再注明标签。

9) 显微镜观察玻片，观察时可依信号强弱调节光亮。