新冠病毒的中和抗体ELISA试剂盒的使用方法

新冠病毒(COVID-19)有四种主要的结构蛋白：刺突蛋白（Spike protein，S蛋白），核衣壳蛋白（Nucleocapsid，N蛋白），膜蛋白（Membrane protein，M蛋白），包膜蛋白（Envelope protein，E蛋白）。刺突蛋白S蛋白有两个亚基：S1和S2，其中受体结合位点（RBD）位于S1亚基上。COVID-19通过RBD与ACE2的结合介导进入细胞内部，因此阻断病毒RBD和人ACE-2的特异性结合是潜在重要的治疗方向之一 !说到这里就又不得不提到中和抗体了。

新冠病毒中和抗体可以特异性识别并且结合新冠病毒的RBD位点，抢先阻止病毒与人ACE-2结合，直接阻断病毒的进一步感染。

Abnova全新推出的COVID-19中和抗体ELISA检测试剂盒利用竞争法ELISA原理，当样本中存在中和抗体时与刺突RBD蛋白结合，从而阻止了RBD与预包被板底的ACE2蛋白的结合，用于新冠病毒中和抗体的定量检测。

实验步骤：

1.将100ul2 ug/ml ACE2加入至每孔，4℃孵育过夜；

2.第二天，50 ul稀释好的样本+50ul 刺突RBD蛋白混合后，室温孵育2h；

3.包被后，移除孔中的ACE2蛋白，加入稀释好的封闭液，室温封闭1h；

4.移除孔中的封闭液，用200ul wash buffer洗涤一次；

5.将孵育好的样本+刺突RBD蛋白混合液100ul加入孔中，37℃孵育2h；

6.移除孔中的样本-刺突RBD蛋白混合液，用200ul wash buffer洗涤，洗4次；

7.每孔中加入100ul稀释好的HRP标记的抗兔Fc标签二抗，37℃孵育1h（由于刺突RBD蛋白是带有兔Fc标签的，所以可以备该二抗特异性识别并结合）；

8.移除孔中的二抗，用200ul wash buffer洗涤，洗4次；

9.向每孔加入100ul TMB显色液，轻轻混合，室温孵育5min，每孔加入100ul终止液，轻轻混合，在450 nm波长下检测吸光度。

标准曲线仅用于说明目的，不应用于计算未知数。每次检测时均应做标准曲线。

（竞争法ELISA，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈负相关）

实验结果展示：

用COVID-19中和抗体ELISA检测试剂盒（Cat＃KA6111）进行对新冠病毒单克隆抗体（7F5、4E10和7F7）的中和测定

用COVID-19中和抗体ELISA检测试剂盒（Cat＃KA6111）对DNAx免疫的新冠病毒多克隆抗体进行中和测定。

用COVID-19中和抗体ELISA检测试剂盒（Cat＃KA6111）对SAM免疫的多克隆抗体进行中和测定。