新冠病毒各类检测方法异同（二）

• 酶联免疫吸附法（ELISA）

ELISA是一种结合抗原、抗体特异性反应和酶对底物高效催化作用的高敏感性免疫学实验技术。测定时，受检的标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应结合在固相载体上。固相上的酶量与标本中的受检物质的量成比例。加入酶反应底物后，底物被催化成有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关。所以，可根据呈色的深浅进行半定量或定性分析。该检测方法灵敏度较高，载体标准化难度较低，但检测速度慢、易污染、步骤较为繁琐。在实际应用中，需要根据抗原抗体的特性设计不同的检测法，目前有双抗体夹心法、免疫抑制法、竞争法、直接法&间接法等类型。

• 胶体金免疫层析法
  

是以胶体金为示踪标志物，应用于抗原抗体检测的一种新型免疫标记技术，氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金试纸，是将胶体金标记的生物大分子在PVC材质的试纸固定，留加样孔，并设检测线和质量控制线。在加样孔上加入样品后，再滴加液体介质，试纸上进行层析。根据试纸上的免疫反应发生结果，即胶体金位置是否有红色条带出现判断检测结果。

该方法无需特殊处理标本，仅需一滴血即可在15 min内通过肉眼观察获取检测结果，突破了现有检测技术对人员、场所的限制，缩短检测时间，操作方便快速，在基层医疗单位及现场检测中广泛使用。目前针对新型冠状病毒，已经报道的有两种胶体金试纸，一种是检测新型冠状病毒的抗原-双抗体夹心法，另一种是检测患者血液里特异性针对新型冠状病毒的IgM抗体-IgM捕捉法。在疫情爆发期，需要大规模做阳性检测时，适合使用总抗检测，同时联卡操作也比较简单，只需要操作一次，而分开检测需要滴加两次样，用两次卡。

• 化学发光免疫分析法

化学发光免疫分析法是将高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、抗体、激素等检测。该法灵敏度高于ELISA，具有特异性强、线性范围宽、结果稳定、操作简化等特点，广泛应用于临床标本的检测。但是该方法对设备、操作、使用环境的要求比较高，使用时需要配套的化学发光仪器。

抗体检测的灵敏度和特异度:灵敏度反映诊断试验检出感染者的能力，若过低，会出现较多假阴性结果，影响疾病的诊断、干预和预后，严重可导至患者过早死亡;特异度衡量诊断试验正确判断非感染者的能力，若过低，则会出现较多假阳性结果，导至医疗资源的浪费，并造成患者及群众的焦虑和恐慌。因此，具有较高灵敏度和特异度是抗体检测技术的应用基础。

1.3

不同检测方法优缺点对比

与抗体血清学检测相比，核酸检测能够检测到处于窗口期的患者，及早发现感染者，是新型冠状病毒检测的“金标准”，但是对检测设备或平台要求较高，高灵敏度的RT-PCR仪价格昂贵，对实验室的洁净度和操作人员要求也较高。此外，核酸检测耗时较长，考虑到样本运输、样本积压的情况，通常最快24小时才可以报告结果。

与核酸检测相比，抗体血清学检测的血液标本更易获取且标本质量有保证、操作简单快捷、很大程度上降低了医护人员在标本采集和检测过程中被感染的风险、更易于基层实验室展开筛查工作等。如果说核酸检测病毒的核糖核酸(RNA)，是病毒存在的直接证据，那么抗体检测的就是患者血液中被刺激产生的抗体，是间接证据，对临床有提示作用。当核酸检测阴性时，将IgM和IgG抗体检测增加进去，可以弥补核酸检测容易造成漏诊的缺点。

目前市场上主流的抗体检测方法学是化学发光，但化学发光平台做新冠试剂并没有优势，主要因为该方法对设备、操作、使用环境的要求比较高。对比核酸检测，化学发光的核心优势就是取样及操作简易，但没有快速检测的优势。针对于普通筛查或者说针对于非发达国家，胶体金检测方法对人员、场地、设备要求都非常低，适用于大规模的快速检测。国际企业如罗氏、雅培等在胶体金方面是没有技术储备的，实际上全球的胶体金检测(包括新冠肺炎、传染病、流感、疟疾、性病等)大部分的供应量还是在中国。