（仅供参考）
冻干菌种 | 号：58003（CS） 参阅附录1 |
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无细菌百日咳菌悬液 | 含有20% 健康羊血的B-G 斜面，2支 |
| 36℃培养 72hr |
传代培养 | 活性炭斜面，6个克氏瓶 |
| 36℃培养 48hr |
摇床培养 | 培养基：参阅附录3 装有4000ml 灭菌培养基的10L瓶子，6个 1. 比浊 2.镜检 3.纯菌 |
| 表面通气36℃培养20-24hr 120-160 rpm |
发酵培养 （300L） | 培养基：同摇床培养 1. 血凝 2.镜检 3.纯菌 4.比浊 5.pH |
| 表面通气、搅拌，36℃培养30-36hr，340rpm |
收获和杀菌 | 上清培养液血凝滴度＞1:16，pH≤8.2 于培养液中加硫汞杀菌（1%→0.01%） |
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盐析 | 发酵液中加入（NH4）2SO4 ，浓度为30.2%（w/v） |
| 2~8℃静置，7天 |
离心收集沉淀 | |
| 4000rpm，4~8℃，6×1L，CR-7，4000rpm，30分 离心30min |
浸提 | 用0.05M PB 1M NaCl，0.01%硫柳汞缓冲液（参阅附录4）浸提抗原 |
| 2~8℃，4~6天，每天振摇2次，1hr/次 |
离心收集上清液 | R9A，4×1L，8000rpm，40分 |
| 8000rpm，4~8℃离心40min |
盐析 | 上清液中加入（NH4）SO4，浓度为20.2%（g/ml） |
| 2~8℃静置7天 |
离心收集沉淀 | |
| 11000rpm，4~8℃离心400min R10A3 10000rpm 50分 6×500ml R12A6 12000rpm 35分 4×500ml |
复溶 | |
| 搅拌3小时 |
透析 | 透析液：0.05M PB 1M NaCl 0.01% 硫柳汞收集上清液 纳氏试剂比色法：检测残余NH4+ |
| 2~8℃ |
离心 | 收集上清液 |
| 4~8℃ 离心5hr 16000rpm ；R13A，12800rpm，5小时30分 或R19A，19000rpm，3小时28分； |
蔗糖密度梯度离心 | 蔗糖浓度（参阅附录5）：10%和30%，收集蔗糖浓度为5%~12%之间的抗原 |
| RPZ35T转头，25,000~30,000rpm，4~8℃ 离心18~20hr |
抗原 | 用Lowrry法测定蛋白氮含量：≥50μgPH/ml |
| 2~8℃保存 |
稀释至最终蛋白 | 稀释液：0.05M PB 1M NaCl 0.01% 硫柳汞 |
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解毒 | A：于抗原中加入戊二醛（2.5%→0.05%）溶液，20℃作用4hr B：然后用赖氨酸（参阅附录6）（10%→0.2%）终止反应，20℃作用2hr |
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透析 | 用0.85% NaCl 0.01%硫柳汞（参阅附录7），透析直至戊二醛含量＜0.001%（比色法） |
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超声匀化 | 2~8℃，透析7~14天 |
| 2~8℃保存 |
原液 | 1. 蛋白氮含量测定 2. 镜检 3. 无菌试验 4. 不耐热毒素试验 5. 特异性毒性试验 5.1 小鼠体重减轻试验：≤10BWDU/ml 5.2 小鼠白细胞毒性增加试验：≤0.5LPU/ml 5.3 小鼠组胺致敏毒性试验：≤0.8HUS/ml 6. 毒性逆转试验：≤0.8HUS/ml 7. 保护性试验 8. 热源试验 |
| 2~8℃保存 |
DTaP配方 | aP：18μgPH/ml D：25Lf/ml T：7Lf/ml Al（OH）3：1.3mg/ml（参阅附录8） |
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成品 | 1. 鉴别试验 2.终容器检查 3. 化学试验 4. 无菌试验 5. 特异性毒性试验 6. 保护性试验 7. 毒性逆转试验 |
