检测荧光信号的步骤有误：一般 SG 法采用 72℃ 延伸时采集，Taqman 法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
引物或探针降解：可通过 PAGE 电泳检测其完整性。
模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
模板降解：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
