昆虫细胞转染实验

昆虫细胞

胎牛血清 脂质体转染剂

培养皿 锥形瓶 培养箱 离心机 转子

1.  接种2x10⁶个Sf9细胞于60 mm 培养皿，在含10%胎牛血清的完全培养液或无血清培养液中培养，于27℃培养30~60 min，让细胞贴壁。

2.  相应于毎一待转染的培养皿，吸取40 ul 无菌水，加入一支无菌聚苯乙烯管中，加入5 ul 线性化的AcMNPV DNA和5 ul  100 ng/ul 的质粒DNA。将Lipofectin 充分混匀后，往DNA溶液中加入50 ul，轻柔混匀，于室温温育15 min。

3.  在15 min 的温育期间，用1.5 ml 不含胎牛血清的完全培养液代替培养皿中的培奍液。

4.  往培养皿中遂滴加入Lipofectin-DNA复合物，同时轻柔旋转平皿加以混匀。于27℃温育4~5 h。

5.  往每个培养皿中加入1.5 ml 含10%胎牛血清的完全培养液（或含有5%胎牛血清的无血清培养液），在27℃加湿培养箱中温育60~72 h。

6.  从每个堉养皿中将转染上清（由培养液和病毒组成）转移至无菌的15 ml 锥形离心管中4℃ 1 000 g 离心10 min。将病毒上清转移至新的灭菌试管，4℃避光保存备用。